性病实验室检测课件.pptVIP

细胞培养 原理： 沙眼衣原体专性细胞内寄生，将其接种于易于其感染的敏感细胞，在适宜培养条件下，可在细胞中形成胞浆内包涵体，染色后镜检可见。 方法： McCoy细胞或Hela229细胞单层包被96孔微量板中小圆盖玻片；标本接种；培养。 1．细胞学检查 HSV感染细胞后,可使细胞产生特征性的病变。取疱液或溃疡渗液涂片，在显微镜下观察细胞的变化，同时观察病毒包涵体，有助于诊断。 2．直接免疫荧光法 直接免疫荧光法检测简单，阳性结果为上皮细胞的浆和细胞核内可见亮绿色的荧光。目前，国外有疱疹病毒分型的单克隆抗体试剂供应，可用于病毒细胞培养鉴定和临床标本检测。 3．抗原酶联免疫试验 酶联免疫诊断试剂盒可检测水泡、溃疡和痂皮中的疱疹病毒。本法与细胞培养比较，敏感性为85.6％，特异性为97.8％。本法的缺点是疱疹病毒不能分型。 4.核酸扩增试验 实时荧光PCR检测 PCR反应时加入一对引物和一个与PCR模板特异性杂交的寡核苷酸荧光探针，探针的5′和3′端分别标记了一个荧光报告基团（R基团）和一个荧光淬灭基团（Q基团）。探针完整时，R基团发射的荧光信号被Q基团吸收，即PCR反应前荧光探针不发荧光；PCR扩增过程中，使R基团和Q基团分离，Q基团对R基团的淬灭作用消失，荧光监测系统就可接收到R基团的荧光信号。每完成一次扩增，就有一个荧光分子形成，通过自动化的荧光检测仪进行实时荧光检测。 5.细胞培养法 1.细胞培养是HSV检测的“金标准”。 2.用免疫荧光等方法对HSV进行鉴定和分型。 3.选择敏感细胞株系，为活力强的幼龄细胞。 4.标本取材后尽快接种(24h)，-70℃。 5.注意其他病毒（水痘-带状疱疹病毒）也可引起类似的细胞病变。需鉴定。 6.血清学检测 1.血清学检测主要采用HSV的特异性的糖蛋白。 2.可检测并区分血清中的抗HSV－1和HSV－2型抗体。 3.检测抗HSV抗体的血清试验可用于证实既往HSV的感染。 4.主要用于回顾原发性感染的诊断，对恢复期或复发性生殖器疱疹的意义不大。 尖锐湿疣的实验室诊断 主要有二大类 1.细胞学及组织学检查 2.免疫学方法和分子生物学方法检测 1．细胞学与组织学检查 ①醋酸白试验 ②巴氏涂片检查 ③组织病理检查 2.免疫学方法和分子生物学方法 ①免疫组化检查包括免疫荧光和免疫组化。敏感性平均为50％。 　②核酸杂交试验包括Southern分子杂交试验、RNA探针原位杂交试验和DNA探针原位杂交试验。 2.免疫学方法和分子生物学方法 ③PCR试验 通用引物：该引物可扩增所有型别的HPV－DNA。 型特异性引物：该引物仅扩增型别的HPV－DAN。PCR检测HPV感染是最敏感的试验。 谢 谢! * * 革兰染色：细胞内革兰阴性双球菌 革兰染色：多形核白细胞增多 美兰染色 直接显微镜检查的临床意义 男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达95%～99%，具诊断价值。 宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅40～70%。 不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染。 亦不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。 淋球菌培养 培养法为诊断淋病的金标准. 对女性淋病的确诊应做淋球菌培养 从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。 培养的敏感性81~100%。 培养的优点有： — 特异性极高（100%）； — 可发现无症状淋球菌感染患者； — 可确诊儿童性虐待； — 可用于进一步作药敏试验； — 可用于治疗后的判愈试验。 淋球菌培养 培养条件 ： 35 ℃ ～36℃，含5%～10% CO2，湿润（70%湿度）的环境。 CO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋及烛缸提供。使用烛缸时，应使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。 培养时间：24~48小时 淋球菌培养-培养条件 淋球菌培养-观察结果 培养24小时后检查平皿，此时没有菌生长的平皿应继续培养至48小时，仍无菌生长才可丢弃，作出淋球菌培养阴性的报告。 对选择性培养基上分离的直径在0.5～1mm，无色、灰白色的半透明菌落应作进一步鉴定。 淋球菌培养-观察结果 淋球菌培养-淋球菌的初步鉴定 初步鉴定淋球菌的主要依据 菌落特征 氧化酶试验 革兰染色 淋球菌的鉴定特征 菌落形态 淋球菌样 革兰染色 革兰阴性双球菌 氧化酶试验 阳性 过氧化物酶试验 阳性 快速糖发酵试验 G+