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生物电子显微技术作业 课后作业C 简述超高压电子显微镜的优点，以及切片与普通超薄切片的不同 。 一般透射电镜观察样品时，电子束无法穿过 0.1 m m 以上的切片，所以需将样品切成 50~70nm 的薄片才能观察。与光镜观察的 3~7 m m 切片对比而言，常将透射电镜的切片称为超薄切片。用于超高压电镜的厚切片制备与普通超薄切片相似，只是有一些特殊要求:其切片材料的制备与普通电镜有所不同。样品块要相对软一些，以保护刀口和便于制作连续切片。覆盖的支持膜要厚，并喷碳加固，以抗高压电子轰击。选用折叠式载网或单缝载网，以防切片脱落和阻挡视野。采用浸没法染色，并适当延长染色时间。包埋前可先进行整体染色。 2.比较透射电镜与扫描电镜在观察效果和研究用途上的不同？它们各自的优缺点是什么？ 扫描电镜 观察效果 电子显微镜是使用电子来展示物件的内部或表面的显微镜。高速的电子的波长比可见光的波长短（波粒二象性），而显微镜的分辨率受其使用的波长的限制，因此电子显微镜的理论分辨率（约0.1纳米）远高于光学显微镜的分辨率（约200纳米）。分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万～几十万倍 3-10nm,放大倍数可达10万倍 研究用途 用以观察为亚显微结构或超微结构。 观察样品形貌、原位分析样品的晶体结构 主要是用来观察物体表面超微形态,适合观察固态的生物材料,也可以观察生物材料断面或剥蚀面的结构（亚细胞形态），不过需要预先进行切割或蚀刻处理。有时甚至也可进行细胞化学标记物的形态观察。由于具有很高的分辨率，多以被广泛用于观察纳米材料。 优点 1.制样过程对芯片内部结构影响较小 2.透射电子穿过样品内部，同样品内部的所有东西发生相互作用，从而直接获得内部结构信息，因此得到综合的高分辨率结果 3.易于调整，通过改变线圈中流过电流的强度，可以改变磁场强度，达到变化折 射率和焦距的目的 4.像差较小，且较为容易消除或校正 5.对电子束流的能量损耗小 1.具有很高的分辨率 2.制样方便，制样周期短，有时可以作非破坏性的分析 3.观察范围大，倍率变化大，立体感强，景深大，观察效果好 缺点 结构复杂，对制作材料的纯度、元件几何形状尺寸的加工精密度等都要 求极高 制样的技术难度大，观察点的定位难，有时需借用聚焦离子束刻蚀才能完成 3.分析周期长 4.成本较高 1.只能在样品表面扫描，信号来自样品表面，不能获得样品内比较深的部位的情况 2.显微像一般不包含结构信号，不能区分单晶、多晶、非晶，不能区分位错、层错、晶界等 3.不适合厚度在微米以下的薄膜的分析需求 3.采用低温处理制作电镜样品的优缺点是什么？ 4.为什么要采用临界点干燥来处理扫描电镜样品？哪些材料不用临界点干燥来处理也能获得满意的图像？ 5m in快速制片染色法. 临床与实验病理学杂志，2009，Oct25. 图 1 A进口OCT包埋的腮腺混合瘤冷冻切片 B 胶片包埋的腮腺混合瘤冷冻切片 图2 肾粗针穿刺小标本, 先制成冷冻 图3 脂肪组织冷冻切片, 脂肪细胞组织结构 平后做冷冻切片, 保持了组织保持完整， 细胞边界清晰，染色鲜艳 图4 甲状腺组织, HE 染色前未经二 图 5甲状腺组织, H E 染色前经二甲苯脱脂 甲苯脱脂处理, 胞核较模糊 处理后，胞核、质结构清晰、透明 我认为这几张图片比较好，清晰，甲状腺组织切片中破碎形成空洞，染色很均匀。 文献二 胥维勇，杨红，李科，杨群.介绍一种FAAPT冷冻切片快速固定液.临床与实验病理学杂志.2002Apr;18 摘要 手术中冷冻切片的病理诊断是根据冷冻切片组织学形态来进行,以确定病变组织的良恶性为目的。制作冷冻切片包括制片、固定、染色三个环节,在冷冻切片中固定液的选择是不可忽视的一个因素。我们在工作中经反复试验在众多固定液中选择FAA液( 福尔马林- 醋酸- 乙醇), 经改良配成一种适合于冷冻切片的FAAPT( 福尔马林- 醋酸- 乙醇- 苦味酸- TritonX- 100) 快速固定液。该液具有固定速度快、渗透力强、HE染色鲜艳、组织结构清晰等优点。 文献三 高美钦, 黄雄飞, 肖志芸, 杨代兴. 不同固定液对冷冻切片HE染色影响的比较. 福建医科大学学报，2001年12月.