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1.蛋白质是生物体内必不可少的重要成分 第二节 蛋白质的基本单位-氨基酸 1、酸水解 产物:L-氨基酸 2、碱水解 产物: L-氨基酸 D-氨基酸 3、蛋白酶水解 产物: 眎 胨 多肽 二肽 氨基酸 2.构成蛋白质的20种氨基酸 氨基酸在结晶形态或在水溶液中,并不是以游离的羧基或氨基形式存在,而是离解成两性离子。在两性离子中,氨基是以质子化(-NH3+)形式存在,羧基是以离解状态(-COO-)存在。 在不同的pH条件下,两性离子的状态也随之发生变化 侧链不含离解基团的中性氨基酸,其等电点是它的pK’1和pK’2的算术平均值: pI = (pK’1 + pK’2 )/2 同样,对于侧链含有可解离基团的氨基酸,其pI值也决定于两性离子两边的pK’值的算术平均值。 酸性氨基酸:pI = (pK’1 + pK’R-COO- )/2 碱性氨基酸:pI = (pK’2 + pK’R-NH2 )/2 酪氨酸的?max=278nm,?275=1.4x103; 苯丙氨酸的?max=257nm,?259=2.0x102; 色氨酸的?max=279nm,?280=5.6x103; 2)与甲醛反应:氨基酸的甲醛滴定法 6)形成希夫碱反应 α- NH2 和醛类化合物反应生成弱碱 (食物褐变反应之一) 7)脱氨基反应 (2)由α-羧基参与的反应 1)成盐反应 应用? 2) 3)酰化反应 4) (3)由α-羧基和α-氨基共同参与的反应 2)成肽反应 (4)侧链R参加的反应 1)巯基及二硫键 2)羟基 第三节 肽 二、生物活性肽 在生物体中,多肽最重要的存在形式是作为蛋白质的亚单位。 但是,也有许多分子量比较小的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有特殊的生理功能,常称为活性肽。 如:脑啡肽;激素类多肽;抗生素类多肽;谷胱甘肽;蛇毒多肽等。 (四)抗菌肽 是一种抗生素(antibiotic),是一类抑制细菌和其他微生物生长和繁殖的物质 一.蛋白质的共价结构 1 肽键的形成 测定步骤 ②二硫键的断裂:几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下,用过量的?-巯基乙醇处理,使二硫键还原为巯基,然后用烷基化试剂保护生成的巯基,以防止它重新被氧化。 ⑤分析多肽链的N-末端和C-末端末端氨基酸的测定:多肽链端基氨基酸分为:N-端氨基酸和C-端氨基酸。最重要的是N-端氨基酸分析法。 二硝基氟苯(DNFB)法 氨肽酶是一种肽链外切酶,它能从多肽链的N-端逐个的向里水解。根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量,按反应时间和氨基酸残基释放量作动力学曲线,从而知道蛋白质的N-末端残基顺序。最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶,水解以亮氨酸残基为N-末端的肽键速度最大。 羧肽酶是一种肽链外切酶,它能从多肽链的C-端逐个的水解。根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量,从而知道蛋白质的C-末端残基顺序。目前常用的羧肽酶有四种:A,B,C和Y; A和B来自胰脏;C来自柑桔叶;Y来自面包酵母。羧肽酶A能水解除Pro,Arg和Lys以外的所有C-末端氨基酸残基;B只能水解Arg和Lys为C-末端残基的肽键。 (2)二硫键的拆开和肽链的分离 几条多肽链通过二硫键交联在一起。可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下,用过量的?-巯基乙醇处理,使二硫键还原为巯基,然后用烷基化试剂保护生成的巯基,以防止它重新被氧化。可以通过加入盐酸胍方法解离多肽链之间的非共价力;应用过甲酸氧化法或巯基还原法拆分多肽链间的二硫键。 B、酶解法 (3)蛋白质分子中肽链的空间结构原则 (2)同工蛋白质氨基酸序列的个体差异和分子病 2. 超离心法 在60 000~80 000r/min的高速离心力作用下,蛋白质分子会沿旋转中心向外周方向移动 用光学方法测定界面移动的速度即为蛋白质的离心沉降速度 蛋白质的沉降速度与分子大小和形状有关 二. 蛋白质的两性离解和等电点 蛋白质与多肽一样,能够发生两性离解,也有等电点。在等电点时(Isoelectric point pI),蛋白质的溶解度最小,在电场中不移动。 在不
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