生化技术---课件.pptVIP

一、盐析沉淀法 通过加入高浓度无机盐，使蛋白质和酶的溶解度降低，从而使之从溶液中沉淀析出的过程或现象称为盐析沉淀。 ① 破坏了蛋白质分子表面的水化层，使蛋白质分子表面的疏水基团暴露，蛋白质分子通过疏水作用相互聚集而沉淀；② 无机盐中和了蛋白质分子表面的电荷，使蛋白质分子之间的电荷排斥作用消失，蛋白质分子的聚集作用增强。 机理： I logS 盐溶 盐析 0 0.15~0.2M logS = β- KsI Ks — 盐析常数，与蛋白质和盐的种类有关。 Ks越大，盐析效果越好。 β — 与蛋白质种类及温度和pH有关的常数。 常用的无机盐：(NH4)2SO4，NaCl，Na2SO4 影响因素：无机盐的种类和浓度，温度，pH值 二、 等电点沉淀法 通过调节溶液的pH值，使其达到酶或蛋白质的等电点，从而使酶或蛋白质从溶液中沉淀析出的过程或现象称为等电点沉淀。 等电点时，蛋白质分子所带的净电荷为零，蛋白质分子之间的同种电荷排斥作用消失，蛋白质分子的聚集作用增强。 机理： 注意： 调pH值，避免局部过酸或过碱，以防止酶变性或失活；只适用于疏水性较强的蛋白，亲水性很强的蛋白，单靠等电点不能使其完全沉淀。 特点： 操作简便，无需后续脱盐操作。 三、有机溶剂沉淀法