【综述】卵原干细胞研究进展张栋栋-中华医学会生殖医学分会.docVIP

卵原干细胞研究进展 张栋栋 朱鹏飞 毕星宇 武学清 （山西省妇幼保健院生殖医学中心，太原，030000） 摘要：雌性哺乳动物成体中不存在生殖干细胞是科学家们的共识，然而最近几年不断有文章发表挑战这一理论。其中以美国Tilly教授及上海交大吴际教授的团队相继声称发现雌性生殖干细胞（即卵原干细胞）。但是随之很多不同的研究者开始发表文章质疑这一发现。通过各自不同的实验思路及方法，双方都能拿出证据证明自己的观点，卵原干细胞是否真的存在仍有争议。不过所幸科学家不断有新的方法来应对雌性卵子储备随着年龄的急剧衰减。 关键词：卵原干细胞 生殖系 多能性 通讯作者：武学清；xueqingwu416@126.com  前言：众所周知，雄性个体内存在生殖干细胞，所以一生中可以源源不断产生新的精子，所以男性随着年龄生殖衰老并不明显。但是，雌性个体随着年龄生殖衰老非常明显，女性的卵泡储备随着年龄迅速枯竭。所以传统理论认为女性体内不存在生殖干细胞，卵泡储备在出生后已经确定，随后不断消耗直至消耗殆尽。但是雌性哺乳动物或人类女性体内是否存在生殖干细胞呢？科学家对于这一问题不断探索，尤其近年来这一问题更是成为科学家争论的焦点。 1、生殖干细胞的发现 2009年，上海交大吴际团队在nature cell biology发表文章声称发现小鼠体内存在生殖干细胞(Zou et al. 2009)，他们在幼鼠卵巢中利用流式分选，选出Ddx4及BrdU双阳性的细胞，并认为这种细胞是生殖干细胞，然后将这种细胞注射入药物处理除去自身生殖细胞的小鼠卵巢中。最终细胞在受体小鼠中发育形成卵子，取卵子体外受精，最终产下小鼠。并经过鉴定小鼠的供体小鼠的后代。Ddx4是公认的生殖系标记物，只在生殖细胞内表达，而BrdU可以证明此细胞具有分裂能力，所以双阳性细胞即使具有分裂能力的生殖细胞，卵子受精前不具备分裂能力，因此他们认为分选得到的细胞就是卵原干细胞。这一发现发表后立即受到很多科学家的关注，并有不同的团队试图重复此实验，不过很少有报道能重复出此结果。直至2012年，Tilly团队在Nature medicine发表类似结果(White et al. 2012)，在成体小鼠中分选出卵原干细胞，经过卵巢移植产生卵子并成功产生后代。并且在女性体内发现卵原干细胞。 2、质疑的声音不断 自从卵原干细胞发现的相关文章发表后，质疑的声音就不断出现。2012年，Hua Zhang 等在PNAs发表文章质疑卵原干细胞的存在(Zhang et al. 2012)，他们利用流式分选出Ddx4阳性的细胞并在体外培养，发现卵巢中分选出的Ddx4阳性的细胞并不会在体外增殖，而作为对照的睾丸分选出的Ddx4阳性细胞可以分裂。所以证明了卵原干细胞并不存在。 2013年，Lei Lei等同样在PNAs发表文章质疑卵原干细胞的存在(Lei Spradling 2013)，他们利用巧妙的实验，随机标记卵巢内的生殖细胞及其他细胞，然后一段时间后，切片观察卵巢组织。如果卵巢中有生殖干细胞，那样就会观察到分裂后成簇的生殖细胞，但是结果只能观察到散在的生殖细胞，成簇的颗粒细胞会被观察到。所以巧妙的证明了雌性生殖细胞不会分裂，卵原干细胞不存在。 2013年，Jihong Yuan、 Dongdong Zhang等在STEM CELLs 发表文章(Yuan et al. 2013)，证明卵巢中不存在生殖干细胞。他们利用恒河猴为研究对象，首先在睾丸中总结了精原干细胞的特征，即表达多能性基因，生殖系基因，具有分裂能力且未分化。所以用免疫组化的方法，得出结论生殖干细胞应该Sox2、lin28（多能性基因）阳性、Ddx4(生殖系基因)阳性、PCNA（增殖标记物）阳性、LaminA（分化标记物）阴性。这样的细胞在睾丸中可以明显找到。但是在卵巢中却找不到类似细胞，也就说明卵巢中没有卵原干细胞。然后，假设在卵巢中有卵原干细胞，那样就与传统理论女性出生时卵子就停滞在双线期相违背，卵巢中就会有双线期之前的卵子。所以在睾丸中进行免疫组化染色，发现了典型的粗线期细胞，即染色体标记物SCP3呈花环形分布而且端粒分布在核膜上，如果卵巢中有卵原干细胞，那样它形成卵子过程中一定会有粗线期细胞产生，但是结果并没有发现，所以进一步证明了卵原干细胞不存在。 2015年，四个不同实验室分别独立实验，试图重复之前发现卵原干细胞的实验，用完全一样的步骤分离卵原干细胞，但是结果是无法重复(Zhang et al. 2015)。他们的工作发表在Nature medicine 上，与之前发表发现卵原干细胞同一杂志，说明主流科学界对于这一问题仍有争议。 3、女性生殖衰老研究前景 虽然卵原干细胞是否存在仍有争议，利用卵原干细胞缓解女性