教学目标1、懂得确保药品微生物学检验方法验证准确性的.ppt

药品微生物学检验方法的验证 为保证检验的质量,对所有的验证方法必须经过验证,只有检测方法验证确认后才能确保验证结果的准确、可靠。才能确保验证结果的准确可靠。  为何规定要进行方法学的验证? 这是由于许多药品本身具有抑菌性（如抗生素类药品、含防腐剂药品）会对检查结果带来影响，因此在进行微生物检测前，需要对样品进行适当的预处理以消除样品本身对微生物检测所带来的干扰。 一、确保微生物检测方法验证的关键因素 二、 验证原理与方法 三、对验证实验结果进行评价与报告 四、验证实验实例 小结及作业 一、确保微生物检测方法验证的关键因素 （一） 验证实验用挑战微生物及其生理特性 　　微生物生理生化状态又和制备和培养条件有密切关系，而这些生理生化状态又直接影响到微生物试验结果。因为微生物在生长不同时期如对数其期的营养细胞和衰老细胞、或芽孢的生理生化状态是不同的，我们试验研究的是群体细胞，而不可能仅是单个的细胞，只有群体细胞均匀，生理生化特性趋于一致，实验结果才会稳定。 （二） 验证用微生物接种液的制备　 验证用微生物接种菌液的制备，必须使用5代之内的菌种。 　　　　　　　　　　表7－1：挑战微生物及其制备条件 挑战微生物 　　　　　 合适的培养基　　　　 　 温度(℃) 时间(h) 铜绿假单细胞（Ps.auroginosa）大豆胰蛋白胨琼脂（TSA） CMCC(B)10104或ATCC9027 或大豆胰蛋白胨肉汤(TSB) 32.5±2.5有氧 18~24 金黄色葡萄菌（Staph.aureus）或营养琼脂培养基或(NA) 32.5±2.5有氧 10~24 AMCC(B)26003或ATCC6538 营养肉汤培养基（NB） 枯草杆菌(Bacillus subtilis) 　　　　　　　　　32.5±2.5有氧 18~24 ATCC6633Z 梭状芽孢杆菌（Cl.sporgenes） 硫乙醇酸盐琼脂(TGA)或 32.5±2.5有氧 18~24 CMCC(B)64941或ATCC11437 硫乙醇酸盐液体培养基(TGB) 白色念珠菌(Candida albicans) 22.5±2.5有氧 2~3天 CMCC(B)98001hu或ATCC10231 萨布罗葡萄糖琼脂（SDA） 黑曲菌（Aspergillus niger） 或玫瑰红钠琼脂培养 ATCC16404 22.5±2.5有氧 6~10天 菌种说明：①ATCC：美国菌种保藏中心（American Type Culture Collection,10801 University Blvd .,Manassas,VA20110-2209）.菌种可在网上订购（htty://）;②CMCC：中国医药微生物菌种保藏中心。菌种可中国药品生物制品检定所（北京）订购。 ATCC与CMCC系列是法定菌种保藏机构。 （二）验证 试验条件 在每个微生物检测方法中均指明了检测的实验条件。除要规定阳性对照或抑菌效力测试试用菌种之外，还包括试验用设施、设备、器具和材料、样品的预处理具体的方式、实验操作程序、培养条件（培养基、温度和时间）等。凡在检测方法中规定是上述关键试验条件均要在方法验证中一一再现并精确执行。 1. 验证试验的设施、设备、器具和材料　　微生物检验总是应在具有一定洁净度要求的环境下进行，《中国药典》（2005年版）有明确规定。无菌检验试验应在以至少10000级区为背景的100级层流工作台内进行；药品防腐效力测定宜在一般的相对独立的环境控制区内的生物安全柜内进行。因此验证的设施、设备、器具和材料应考虑和平时检测的条件相同，检验用设备和器具包括压力产生设备（真空压力泵）、过滤器、过滤膜、量器具等均要在验证方案中指明所用器具的规定、型号和来源，尤其是过滤器、过滤膜等与检品和培养基直接接触的器具和材料一定要注明，并且一旦确定并通过了验证，在实际检验时就不得更改，否则须重新验证。 2. 验证试验用的稀释剂（液）、冲洗液 3．无抑菌性样品的验证方法　　 对没有抑菌作用的产品，这举类验证试