柱色谱分离实验.ppt

了 解： 1. 柱色谱法分离有机物的原理。 2．固定相和流动相的选择原则。 掌 握： 1. 色谱柱的填充方法。 2．柱色谱分离的基本操作。 柱色谱分离示意图 玻砂防堵塞 装柱需紧密 加压不可大 溶剂勿流干 色谱法在有机化学中的应用: 分离混合物 精制提纯化合物 利用比移值(Rf)鉴定化合物 跟踪反应进程 色谱法的特点: 分离效率高 复杂混合物,同系物,异构体等。 灵敏度高 可以检测出μg? g-1(10-6)级甚至ng? g-1(10-9) 级的物质量。 分析速度快 几分钟或几十分钟内可以完成一个试样分析。 仪器和试剂 1.仪器 锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱 2.试剂 柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲 基橙、亚甲基蓝。 H2O∶?95?%乙醇?=?1∶?1?(A?液)? 0.?2mol·?L?-1HCl∶?95?%乙醇?=?1∶?1?(B?液) 实验步骤 装柱： 1、装色谱柱： （1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂 直固定在铁架台上。 (2) 关闭活塞，向柱中倒入蒸馏水（也是洗脱剂，至柱体积的 1/2） （3）填吸附剂：称取10g?硅胶于小烧杯中?,加入?15mL?蒸馏水?,用玻 璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱, 使其逐渐沉入底 部。用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型 瓶承接, 控制滴速为1 滴／秒,装完后在上面加一层脱脂棉（ ，操作时要注意吸附剂始终不能露出液面）。 实验步骤（续） 加样：当液面刚好流至脱脂棉平面相切时，立刻关闭活塞，?加入?5mL左右的A?液?,当硅胶面又将要露出时?,关紧活塞?,用量筒准确加入?0.?50mL?以?A?液做溶剂的混合液(含甲基橙和亚甲基蓝各为?0.?400?g·?L?-1)?。 洗脱：待此混合液将要渗入柱内时?,立即用?A?液洗脱?,此时可以观察到有鲜明的黄、蓝两条色带形成。黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移?,而其顶部蓝色带不移动?,当黄色带到达柱底部时?,更换接受器?,全部收集此黄色带?,洗脱时间约?10?min。此后改用B?液做洗脱剂?,这时可看到蓝色带开始下移?,当亚甲基蓝色带到达底部时?,更换接受器?,全部收集此蓝色带?,洗脱时间约?30?min。 小 结 柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝 实验原理 甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示: 甲基橙 亚甲基蓝 由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能力弱、解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。本实验以硅胶为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。 三、实 验 内 容 装柱 加样 洗脱 收集 鉴定 干法：10g 硅胶 +乙醇 先用乙醇 后用水 操作 组分颜色 组分颜色 1mL样品 加样操作 0.5mL×2乙醇洗涤 柱色谱操作： 实 验 步 骤: 装置图 装柱 洗脱 * 柱 色 谱 Column Chromatography 一、实 验 目 的 色 谱 法 简 介 色谱法亦称色层法，层析法等，是分离，纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一，还可定量分析。 色谱法分类 固定相、流动相的物理状态 操作形式 分离原理 液—固色谱法 气—固色谱法 气—液色谱法 液—液色谱法 柱色谱法（column chromatography） 薄层色谱法（TLC） 纸色谱法（paper chromatography） 气相色谱（GC） 高效液相色谱（HPLC） 吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 排阻色谱 操作形式 柱色谱法（column chromatography） 二、实 验 原 理 混合物 吸附剂(固定相) 洗脱剂(流动相) 二、实 验 原 理 二、实 验 原 理 吸附剂的性质：均匀、表面积大、不反应、吸附能力不同 化合物的结构：化合物的吸附性和它们的极性成正比 洗脱剂的极性：溶解度适中、不反应、易获取回收 影响分离效果主要因素 和 和 在氧化铝柱子上若分离下列各组混合物，哪一个组分先被洗脱下来？ 三、实 验 内 容 装柱 加样 洗脱 收集 鉴定 干法：10g 硅