第八章药物制剂的微生物学检查.ppt

第八章 药物制剂的微生物学检查 【学习目标】 1.掌握药物的体外抗菌试验方法，了解药物的体内抗菌试验。 2.掌握一般灭菌制剂的无菌检查方法和原理，熟悉特殊药品的无菌检查方法。 3.掌握非灭菌药物的细菌、霉菌和酵母菌计数方法，熟悉药品的大肠埃希菌检查方法。 4.了解一般药品的大肠菌群、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌的检查方法。 第一节 药物的抗菌试验 药物的抗菌试验目的是为了检查药物的抗菌能力，包括药物的抑菌试验和杀菌试验。 一般先进行体外抗菌试验，再进行体内抗菌试验。 一、药物的体外抗菌试验 (一)体外抑菌试验 1.连续稀释法 用于测定药物的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC), MIC是指药物能抑制细菌生长的最低浓度，以μg/ml或U/ml表示，数值愈小，药物的抑菌作用愈强。 （1）液体培养基稀释法： 在试管中用液体培养基进行2倍系列稀释药物，使其终浓度（μg/ml）为512、256、128、64、……等 → 在每管中加定量的试验菌液（5×105cfu/ml） → 24～48h培养→观察结果，以能抑制试验菌生长的最低浓度为该药的MIC。 如何判断抑菌还是杀菌？ 液体培养基稀释法测定药物的最小抑菌浓度(MIC) 液体培养基稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）通过平板培养证实 （2）固体培养基稀释法： 1）平板法： 方法：将不同浓度的药液按1︰9混入尚未凝固的琼脂培养基中（厚度3～4mm） → 制作成含有递减浓度药物的琼脂平板→将定量的菌液（0.5麦氏比浊度菌液稀释10倍） → 点种法逐个点种于平板（要进行阴性对照）→ 培养 → 测得各种细菌对药物的MIC（μg/ml）。 应用：测定多种细菌对同一药物的MIC； 各种药物的抗菌活性测定； 新抗菌药物的筛选。 优点：不受药物颜色及浑浊度的影响，且手续简便。 2）斜面法： 方法：将不同递减浓度的药液→混入未凝固的装有琼脂培养基的试管中→制成斜面→接种定量的试验菌液→培养→测知MIC （μg/ml）。 应用：适用于必须较长时间培养的试验菌(如结核杆菌)或避免孢子飞扬污染环境的霉菌。 2.琼脂扩散法 原理：是利用药物在琼脂培养基中扩散，并在一定浓度范围内抑制细菌生长，形成无菌生长的透明圈即为抑菌环。抑菌环的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系（抑菌环越大， MIC 越小）。 方法：在琼脂平板上→接种（涂布法或倾注法）试验菌→加药于平板上→培养18～24h→观察测量抑菌环直径，或抑菌范围的大小→评价药物抗菌作用的强弱。 应用： 用于定性试验； 初步判断药物的抗菌作用的大小。 缺点：精确度较差、干扰因素较多。 （1）滤纸片法： 方法：①无菌滤纸片→蘸取一定浓度的抗菌药物→放置 于含菌平板表面。 ②将预先配制含药的干纸片→贴在接种细菌的 平板表面。 国际标准K-B法（Kirby-Bauer法）： 水解酪蛋白(Mueller-Hinton，MH)培养基； 被测细菌的浓度、纸片的质量、纸片含药量； 其他试验条件。 以卡尺精确量取抑菌环的直径大小， 判断该菌对该药物的 耐药 （resistant,R）、 中介（intermediate,I） 敏感（susceptible,S） 优点：在1个平板上测定多种药物对同一试验菌的抗菌作用 应用：新药的初筛试验，以初步判断新药是否具有抗菌作用 病原菌的药物敏感试验，供医生选用药物时参考 药敏试验结果解释： “耐药”（R）：即表示测试菌不能被在体内感染部位可能达到的抗菌药物浓度所抑制，临床治疗无效； “中介”（I）：提示该细菌对常规用药体液或组织中的药物浓度的反应率低于敏感株，使用高于正常给药量有疗效； “敏感”（S）：即表示测试菌可被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制。 方法：是在无菌平板上挖直沟，沟内加入药液，然后在沟两旁接种几种试验菌，经培养后观察细菌的生长情况，根据沟和细菌间抑菌距离的长短来判断药物的抗菌能力。 应用：测试一种