第十二章核酸的生物合成-广州大学.ppt

第十二章 核酸的生物合成 广州大学生命科学学院 柯德森 一.DNA的生物合成 (一)DNA的半保留复制:DNA的两条链在复制时分开,以碱基配对的原则按照单链DNA的核苷酸顺序合成新链,组成新的DNA分子.每个子代分子的一条链来自亲代DNA,另一条链是新合成的,这种复制方式称为半保留复制. (二)DNA复制的起始点和方向 开始于染色体上固定的起始点,起始点含100~200个碱基对; 先是DNA的两条链在起始点分开成叉子样的“复制叉”，随着复制叉的移动完成DNA的复制过程； 复制方向：可以是单向的，也可以是双向的。 大多数生物染色体DNA复制是双向进行的； 真核生物染色体的不同位置上有多个起始点，真核生物的复制叉移动较慢，但由于有多个复制叉，所以DNA的复制总速度比原核生物还快。 （三）原核细胞DNA的复制（DNA指导下的DNA合成） DNA复制的基本过程 DNA复制所需的酶 DNA聚合酶(polymerase)反应特点： 以四种dNTP为底物 需要模板指导 需要有引物3’-羟基存在 DNA链的伸长方向是5’-3’ 产物DNA的性质与模板相同 1.DNA聚合酶I(Kornberg酶):单链球状蛋白，含锌。有聚合酶活性和外切酶活性，其中3’-5’外切酶活性起校正作用，5＇-3＇活性起修复和切除引物作用。DNA聚合酶I主要起损伤修复作用。 2.DNA聚合酶II:也具有聚合酶和外切酶活性,但没有外切酶5`--3`活力,活性较低,在体内功能不清楚. 3.DNA聚合酶III:分子质量450000,10个亚基, α亚基分子质量140000,是聚合酶催化作用的主要成分,β亚基也称DNA聚合酶III辅酶,功能是识别引物并使DNA母链与引物链结合.是大肠杆菌三种聚合酶中活力最强的,在大肠杆菌中主要负责DNA链的延长. 真核生物DNA聚合酶：有α 、β、γ、δ、ε五种，性质与大肠杆菌的酶相似，多无外切酶活性。 α 相当于聚合酶III，用于引发、滞后链合成；β主要起修复作用，γ位于线粒体，δ合成前导链，但前50个碱基由a合成。 DNA连接酶：催化一条DNA切口处的5’-磷酸和另一条DNA链的3’-羟基生成磷酸二酯键,但二条链必需都 与同一个互补链结合,而且二条链必须相邻. 连接过程需供能，细菌利用NAD，动物和噬菌体利用ATP。 4.双链DNA复制的分子机制 (1)冈崎片段和半不连续复制: 半不连续复制（semi-discontinuocos replication）: DNA复制时,新DNA的一条与复制叉移动方向一致,由5’向3’方向连续复制，称为前导链；另一条链合成则是不连续的,即与复制叉移动方向相反,先按5`向3`方向合成若干短片段, 称为冈崎片段，最后通过连接酶的作用连接成完整的DNA，称为后随链(滞后链)。 (2)冈崎片段的RNA引物: 冈崎片段的合成需要一段与模板DNA的碱基互补的RNA短片段作用为引物. 首先由引物合成酶由5’向3’方向合成10个核苷酸以内的RNA引物，然后聚合酶III在引物3’-羟基上合成DNA，再由聚合酶I切除引物，填补空白，最后DNA连接酶将冈崎片段连接起来，形成完整DNA。 (3)母本DNA双链的分离 复制时必需解链，利用拓扑异构酶(DNA旋转酶)和解螺旋酶(解链酶)来解链的。拓扑异构酶II兼有内切酶和连接酶活力,能使DNA链迅速断开又迅速接上,当与ATP水解偶联时,可使松弛态的DNA转变成超螺旋态;在没有ATP时,使超螺旋DNA松弛,可协助解链酶使DNA模板解旋. 解螺旋酶通过水解ATP来解开双链，每对碱基需2个ATP。单链结合蛋白(SSB)可与解开的单链结合，防止复性和水解。 (4)DNA聚合酶的校对作用: DNA聚合酶的3`---5`外切酶活性是校对新生DNA链和改正聚合酶活性所造成错配的一种手段; DNA聚合酶的校正功能只是保证复制准确性的途径之一,实际上有多种蛋白质参与这个过程; 真核生物DNA聚合酶一般没有校正功能,其复制准确性可能是由其他途径来保证的. (四)真核细胞DNA的复制(DNA指导下的DNA合成): 真核细胞DNA的复制过程基本相似于原核生物,但也有以下特点: 真核细胞DNA复制有多个起始点; 真核生物DNA聚合酶有5种(α、β、γ、δ、ε),催化DNA复制的主要有二种聚合酶(a和δ)相互协作, δ催化前导链的合成,而a催化后随链的合成; 真核细胞复制到线性染色体的未端时,复制过程是在端粒酶的作用下完成的. 生物细胞DNA复制分子机制的特点是: (见教材P254) (五)反转录作用(RNA指导下的DNA合成) 反转录酶(逆转录酶, reverse transcriptase):以4种脱氧核苷三磷酸为底物,催化生成与一条RNA序列互补的DNA链,这种酶叫反转录酶或逆转录酶. 互