植物化学保护实验指导（三）.docVIP

实验二十、植株生长量的测定 指示植物在药剂处理过的土壤中或混药的水溶液中培养一定时间后，测定植株的生长量，如禾本科植物可测量叶子长度，阔叶植物可测量叶面积；或将地上部分切下称其鲜重。抑制光合作用的除草剂常用这类方法。 1、去胚乳小麦幼苗法 去胚乳小麦幼苗法也是上海植物生理研究所1964年建立的生测方法。这是一个测定抑制光合作用除草剂的专一方法，与测定这类除草剂的其它生测方法（如番茄法、燕麦法）相比，它具有操作简便、测定周期短等优点。 选择饱满度一致的小麦，浸种2h后，排列在铺有湿滤纸或纱布的搪瓷盘内，在20℃左右进行发芽。培养3-4天后苗高2-3cm，精选高度一致的幼苗，轻轻取出以免损伤根部，然后摘除胚乳，在水中漂洗后作为指示生物。 以直径4.5cm，高5.0cm的小玻璃杯作为测定容器，每杯放入不同浓度的药液3ml和稀释10倍的培养液6ml，每杯插入上述去胚乳小麦幼苗10株。在温度21～26℃左右，光照下培养6～7天，测定小麦苗的株高，以株高抑制率来表示除草剂活性。 培养液配方如下： 硫酸铵3.2g 磷酸二氢铵2.25g 硫酸钙0.8g 氯化钾1.2g 硫酸镁1.2g 微量元素0.01g 其中微量元素组成为： 硫酸亚铁 10g、 硫酸铜3g、 硫酸锰9g、 硼酸7g 硫酸锌3g 将上述配方加入 1L水中，使用时再稀释10倍。 2、番茄法 取20×120mm的试管，编号。将供试药剂用培养液稀释成一系列梯度浓度溶液，每只试管加入10mm。严格挑选生长健壮，大小高度一致的具 2片真叶的番茄幼苗，将主根及子叶剪掉，称鲜重后插入试管，每管2～4株，在漫射光照射下，25℃左右培养2周，然后再取出称重。培养期间应每天补加蒸发的水分。以生长抑制率来评价活性，求出EC50，比较活性。 生长抑制率（％）= 番茄法适合于脲类及均三氮苯类光合作用抑制剂的生物测定，方法灵敏，但培养周期较长，其间要每天补足水分，比较麻烦。 3、燕麦法 将土样烘干。过lmm筛后。加入除草剂，使土壤水分达到最大田间持水量的60％。取200g土装人底部带孔的玻璃皿中，播种已催芽露白的燕麦种子10－12粒，出苗后，定8株苗，每天从底部灌水，保持原来的重量，于光照下培育14d后，测定植株地上部鲜重与干重，或幼龄叶片数及第2、3叶片的重量，计算IC50。 本法适于测定均三氮苯类除草剂如阿特拉津、西玛津以及取代脲类除草剂的活性，淋溶及持效期等。前者灵敏度0.05-0.1ppm，后者为0.1-0.3ppm。 此外，也可测定幼苗的含水量、水提取物的导电性及中性水溶性物质重量及其占干重的百分数。 由于抑制光合作用除草剂引起植物蒸腾作用下降（气孔关闭引起的），而根系吸水不受影响，因此，在鲜重与干重明显下降之前，植物体内含水量反倒明显增加。因此，可用幼苗含水量作为生测指标一 此类除草剂也使植株体内中性水溶性物质（碳水化合物）的含量在干鲜重下降前明显下降，因而可以测定中性水溶性物质（糖）的含量为生测指标，比测定干鲜重更为灵敏。 4、叶鞘滴注法 Tarlor和Loader（1984）为了筛选有效的防治野燕麦的除草剂混剂，设计了一种快速，简便的除草剂生测方法——叶鞘滴注法。 当正常生长的燕麦长至1叶1心时，在第一叶张开的叶鞘里滴加10ul供试的一定浓度的除草剂。24-48h后，切下2㎝长的一段，插入清水洋菜培养基。再经24h（此时对照叶片伸长约11～13㎜）取出测量每一剂量处理的叶片延伸长度，并评判除草剂活性。 5、 萝卜子叶法 将萝卜籽插入整滤纸的培养血中，加适量水，加盖后在27℃培养箱中黑暗培养30h，从幼苗上切下子叶备用。在盛有用磷酸盐缓冲液配制的不同浓度的除草剂（5－10 ml）溶液中放入10片大小均匀的子叶，加盖后在25－27℃温室或生长箱中。光照强度为2 000—3000LX的光照下连续培养 3d后。称鲜重并测定叶绿素含量，计算IC50。 本法适于测定触杀性及影响氮代谢的除草剂。 6、再生苗侧重法。 将生长均匀一致的10株香附子块茎移植到盆钵中。二周后生长正常时，分别用不同浓度的草甘磷处理香附子叶，一周后剪除香附子茎叶（距上表1cm），再过一个月左右测定再生苗的鲜重，这样可反映传导性除草剂对地下部分再生能力的抑制程度。 也可用玉米做试材，将玉