植物病毒RNA沉默抑制子的研究进展-Word文档.docVIP

植物病毒编码的RNA沉默抑制因子研究进展 (赵淑玲 学号: D08037 导师: 梁建生教授) 摘要: RNA 沉默是真核生物用来抵抗病毒入侵的一种普遍而又古老的防御机制,而病毒在进化过程中也相应地产生了一些与之抗衡的功能,其中编码沉默抑制子就是对抗RNA沉默的有效策略。它们分别能够在不同阶段,以不同的方式干扰来自于寄主的RNA沉默,从而有效地建立侵染。本文首先简单介绍了RNA沉默的机制及其在植物抗病毒中的作用。然后主要针对目前几个研究较清楚的植物病毒RNA沉默抑制因子的主要特点和作用机制进行了阐述,并讨论了RNA沉默抑制子的研究方法及应用前景。 关键词: RNA沉默; 抗病毒; 植物病毒; 抑制因子 RNA沉默是一种在真核生物体内普遍保守的，发生在RNA水平的，基于核酸序列特异性的相互作用来抑制基因表达的调控机制。在植物中RNA 沉默也被称为转录后基因沉默（post transcriptional gene silencing, PTGS）,在动物中称为RNA干扰（RNA interference, RNAi）,而在真菌中则称为基因消除（quelling）[1]。dsRNA是RNA沉默起始的关键分子，dsRNA首先被Dicer(RNA酶III样的核酸酶)降解为不同长度的小RNA，然后这些小RNA整合入RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex, RISC）中，并引导RISC降解同源mRNA或抑制翻译。dsRNA降解产物分为两类：一类是 21~22nt核苷酸的单链小RNA（microRNA，miRNA），它是从内源的hairpin RNA前体降解而来；另一类是 3’端具有2nt突出的21~26nt的双链小干扰性RNA（small interfering RNA，siRNA）[2]。目前发现RNA沉默主要存在两类生物学效应：一类是由miRNA介导的对内源mRNA转录和翻译的调控，与生物体的发育有关；另一类是siRNA介导的对病毒、转基因和转座子等外来入侵核酸序列特异性的RNA降解，在防御病毒侵染和监视外来核酸中起作用。 RNA沉默现象是真核生物中普遍存在的抵抗外来核酸入侵的一种防御机制,并且在外界的选择压下不断的进化成一种很完善的防御体系,最大程度的保护真核基因组免受侵害。 在与寄主长期进化过程中，许多植物病毒为了成功侵染同时也编码一种蛋白来对抗RNA沉默，这类蛋白可以抑制RNA沉默的各个步骤，称为RNA沉默的抑制因子(RNA silencing suppressor，RSSs)[3]。迄今为止,已经在很多病毒中发现其编码的蛋白具有沉默抑制子的活性。本文就植物病毒RNA沉默抑制因子的研究进展作一介绍，包括抑制子的特点、抑制RNA沉默的机制和其鉴定方法等方面。 1 RNA沉默 1.1基因沉默现象的发现 RNA 沉默现象最早是在植物中发现的。1990年，Napoli等人[4]将一个能产生色素的基因CHS置于一个强启动子后，导入矮牵牛中，试图加深花朵的紫颜色，结果没看到期待的深紫色花朵，多数花成了花斑的甚至白的。1995年，美国康乃尔大学的Guo等人[7]试图利用反义RNA技术阻断线虫的par-1 基因的表达，同样出现了par-1 基因关闭的现象。1998年Fire等人[8]利用秀丽新小杆线虫做了一系列关于各种RNA引起阻抑效应的实验，结果发现针对靶基因的双链RNA分子比单链反义RNA及单链正义RNA有较强的基因阻抑效应，并把此现象称为RNA干扰。此结果证明了共抑制现象是由正反双意链共同作用的结果。随后,众科学家纷纷开始研究这种现象中的真正作用因子。1年后,英国Baulcombe研究小组[9]找到了RNA沉默中关键作用因子:他们在研究转基因及病毒诱导的RNA沉默的过程中,发现1种长约21~25 nt之间的小片段RNA仅存在于沉默的植株中,并且与沉默的内源基因具有同源性。此发现无疑给敏锐的科学家提供了一个很重要的信息,即这种被忽略的小段可能在生物体中发挥其他大片段无法替代的作用。 Zamore小组[10]发现在果蝇胚胎的体液中,双链RNA能够被切割成上述的小片段RNA ,并且证明与RNA干扰有关,他们将之称为小干扰性RNA(smallinterfering RNA ,简称siRNAs)。 随后,这种小片断RNA 被发现存在于各种发生RNA 沉默的生物体内,植物的RNA 沉默现象与动物的RNA 干扰现象也由此相互联系起来[11] 。人们相继发现这种现象广泛存在于植物、真菌、线虫、昆虫等几乎所有的真核生物中，是一种非常保守的机制并且具有广阔的应用前景。为此2006年的诺贝尔生理学或医学奖颁发给了这一机制的发现者Andrew Z. Fire和CraigC. Mello。 1.