泛素—蛋白酶体与蛋白酶体抑制剂-上海交通大学医学院精品课程.docVIP

泛素-蛋白酶体及其抑制剂 沈子珒 许啸声 李稻审校 上海交通大学医学院 病理生理学教研室 摘要：蛋白酶体与泛素化信号系统一起构成的泛素—蛋白酶体（UPP）是哺乳动物细胞内主要的蛋白水解酶体系，参与Bonezomib（Velcade，PS-341）是近年研究较多的一种蛋白酶体抑制剂。 关键词：肿瘤 蛋白酶体 泛素 蛋白酶体抑制剂 PS-341 泛素—蛋白酶体通路（Ubiquitin–proteasome pathway，UPP）的蛋白酶体（proteasome）是一种具有多个亚单位组成的蛋白酶复合体，蛋白酶体沉降系数为26S，故又称26S蛋白酶体。蛋白酶体水解蛋白的前提是靶蛋白的泛素化。在UPP中，各种靶蛋白质泛素化后，先被26S蛋白酶体的19S亚单位识别，随后泛素化靶蛋白脱泛素链和变性，进入20S亚单位的筒状结构内被降解成3~22个多肽。由于蛋白酶体具有精确降解细胞内各种目的靶蛋白，进而参与基因转录细胞周期调节以及受体胞吞、抗原呈递各种细胞生理过程 1．　蛋白酶体组成 1979年，Goldberg等首先报道在大鼠肝脏和网织红细胞中存在一种分子质量为700 kD的受ATP激活的中性蛋白水解酶。此后，一些在形态、功能及免疫学特征上与之相同的颗粒通过不同途径被分离出来，被统一命名为蛋白酶体[2]。在真核生物进化中，蛋白酶体具有高度的保守性，其简单形式甚至存在于古细菌和真细菌中。真核细胞内的蛋白酶体分布于胞质与胞核内，有的与内质网或细胞骨架相结合，约占细胞蛋白质总量的1％。有功能的26S蛋白酶体是由20S催化颗粒（catalytic particle, CP）、11S调控因子（11S regulator）和2个19S调节颗粒（regulatory particle, RP）组成，其分子量为2.4MD，是ATP依赖性蛋白水解酶复合体。 1．1　20S催化颗粒（20S CP） 人类蛋白酶体CP的沉降系数为20S，分子量700~750kD。它由α环和β环组成，每个环各有7个相同的亚单位，分别以α1-7β1-7β1-7α1-7顺序排列成圆桶状结构，20S CP中间由两个β亚单位环组成。几乎所有β亚单位都含有一个N 端前导序列，尽管此序列在20S CP装配过程中被切除，但在引导真核生物β亚单位的正确折叠以及β与α亚单位的组装中有重要作用[3]。当β亚单位的N端前导序列被切除后，Thr残基被暴露出来，Thr是酶的活性位点，分别存在于β环的内表面，使β亚单位具有类似的丝氨酸蛋白酶的催化作用[4]。例如，β亚单位N端的折叠方式允许Thr的-OH对底物发动亲核反应形成半缩醛，而Thr的α-NH3可代替丝氨酸蛋白酶中His的咪唑基作为质子受体。此外，活性位点附近的一个Lys残基与特定的丝氨酸蛋白酶中一样，也起着催化剂的作用。目前认为，在20S CP内起催化作用的亚单位主要是(1、(2、(5。不同的β亚单位的催化活性尽管不同，但能互相协调使蛋白酶体具有多种蛋白酶活性，如类糜蛋白酶活性(chymotrypsin-like, ChTL)、类胰蛋白酶活性（trypsin-like，TL）、肽-谷氨酰肽水解酶活性（post-glutamyl-peptide hydrolyzing，PGPH）、支链氨基酸肽酶活性、中性氨基酸切割活性。在20S CP圆桶状的两端由α亚单位环组形成，环口的中央被α亚单位(α1、α2、α3、α6、α7)的N末端肽链所占据，使α环的外侧完全关闭，阻止胞内非目的靶蛋白质进入20S CP内，而遭到降解破坏。不论在种间或种内，α类亚单位遗传特征均比β类亚单位更为保守。 1．2　11S调控因子 在哺乳动物细胞内存在参与调控蛋白酶体功能的复合物，11S调控因子（REG或PA28）是其中之一。11S调控因子的亚单位分子量为28KD，其亚单位分为：ERG(、ERG(、ERG(（Ki抗原）三种。亚单位的氨基酸序列大部分具有同源性，但17-34残基为易变区，这也赋予亚单位的特异性。ERG(和ERG(可优先形成一个七瓣形调控复合物—11S调控因子[5]，并结合到20S CP末端，而ERG(不能与ERG(和ERG(结合形成11S调控因子。11S调控因子本身不具有催化和降解大分子蛋白的功能，但可激活蛋白酶体的蛋白酶活性，以及在促进抗原肽产生中起到重要的作用[5]。Wilk等人认为，ERG(低聚合体对蛋白酶体的活性有激活作用，而单体时却是蛋白酶体的强有力抑制物[6]。 1．3　19S调节颗粒（19S RP） 19S RP（19S调节复合物、19S帽或PA700）分别由20个亚单位组成，分子量为700KD，位于20S CP的两端。从酵母到人类，19S RP的多数亚单位具有高度的保守性。19S RP形成盖部 (1id)和基底部(bas