第一节淋巴细胞的功能检测一、T细胞功能检测二、B细胞功.pptVIP

第十五章 免疫细胞功能检测技术 第一节 淋巴细胞的功能检测 一、T细胞功能检测 二、B细胞功能检测 三、NK细胞活性测定 第二节 吞噬细胞功能检测技术 一、中性粒细胞功能检测 二、巨噬细胞功能检测 第三节 免疫细胞功能检测的临床应用 对淋巴细胞群，中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等功能测定可以有效评价机体特异性和非特异性免疫功能。 第一节 淋巴细胞的功能检测 淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定 淋巴细胞 T细胞（负责细胞免疫功能） B细胞（执行体液免疫功能） NK和K细胞（非特异性免疫作用） 一、T细胞功能的检测 T细胞增殖试验 T细胞分泌功能测定 T细胞介导的细胞毒试验 体内试验 （一）T淋巴细胞增殖试验 1. 原理： 2. 淋巴细胞转化的刺激物 非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞 特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原 3. 检测方法 （1）形态学检查法 方法学评价： 优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。 缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。 （2）3H-TdR掺入法 优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。 缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。 (二) T细胞分泌功能测定 体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功能。 （三）T细胞介导的细胞毒试验 1.原理： 2.方法 形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残留肿瘤细胞 同位素法 ：淋巴细胞（CTL）+含51Cr 的肿瘤细胞 肿瘤细胞破坏 51Cr 释放 测定γ射线 (四) 体内试验 特异性抗原皮肤试验 PHA皮肤试验 二、B细胞功能检测 B细胞增殖能力的试验 溶血空斑试验 B细胞抗体形成功能的检测 体内试验 (一)B细胞增殖能力的试验 抗IgM 细菌脂多糖 SAC的SPA (二) 溶血空斑试验 1. 原理： 2. 方法学： 经典溶血空斑形成试验 被动溶血空斑试验 3．临床应用与评价 溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响 评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。 (三)　 B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法 1.原理： 2．应用与方法学评价： 该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。 优点： 稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。 (四)　体内试验 体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。 三、NK细胞活性测定 第二节 吞噬细胞功能检测技术 吞噬细胞的吞噬活动大体分为趋化、吞噬和胞内杀灭作用三个阶段，据此建立相应的检测方法。 一、中性粒细胞功能检测技术 二、巨噬细胞功能检测技术 吞噬细胞的功能： 趋化 吞噬 胞内杀灭作用 一、中性粒细胞功能的检测 细胞趋化功能的检测 吞噬和杀菌功能的检测 (一) 细胞运动功能——趋化功能检测 1.原理： 2. 方法学： 琼脂糖平板法 (二)吞噬和杀菌功能测定 1．显微镜检查法： 2. 溶菌法 3．NBT还原试验 二、巨噬细胞功能检测 (一)炭粒廓清试验 (二)吞噬功能检测 巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。 (三)巨噬细胞溶酶体酶的测定 1．酸性磷酸酶的测定 硝酸铅法 偶氮法 2．非特异性酯酶的测定