总蛋白测定(双缩脲法)SOP.docVIP

q 总蛋白测定（双缩脲法）SOP 原理：所有蛋白质分子都含有肽键。在碱性溶液中，肽键与铜离子结合，生成蓝紫色的化合物。蓝紫色化合物在546nm(540nm-560nm)处的吸光度与肽键的数量成正比关系，依次可以计算蛋白质的含量。 方法：双缩脲法 试剂：总蛋白试剂 其含量为 氢氧化钠 0.6mol/L 酒石酸钾钠 32mol/L 碘化钾 20mol/L 硫酸铜 12mol/L 储存条件及有效期：（1） 原包装试剂在2℃-8℃避光贮存，有效期36个月。 （2） 试剂开盖后在2℃-8℃避光保存，稳定期30天。 5. 样本要求： （1） 样本种类：新鲜无溶血血清。 样本采集：取空腹静脉血3.0ml，置于带分离胶试管中，标本采集后，3000r/min离心5min，分离血清，立即密封送检。 样本干扰：对反应吸光度有干扰的样本，包括溶血和浑浊的样本都可能影响检测结果，遇上述情况建议重新采集。 样本保存：密封无蒸发条件下样本2℃-8℃可稳定3天。 6. 检验步骤： （1） 开生化仪见生化仪的SOP。 操作步骤：参数设置 ；试剂装载；校准；质控；样本装载；测定；结果审查；报告。 参数设置 总蛋白测定参数 通道号 1 加样体积 3.0ul R1体积 150 ul 主波长 540nm 次波长 660nm 方法 END 初始测量点 0 末始测量点 27 试剂装载 每天在生化仪上进行试剂检查，检测的样本数，如发现量不多或不能满足当天需要，则需要加试剂，注意同一批号，不同批号的不能混用。 校准 换一批新试剂或质控做的不理想需要校准。 质控 在做样本之前每天做质控，质控符合要求才可以做样 本，不符合要求需要做校准，做完校准后，用校准品当样本来测，做质控。 样本装载 样本符合要求，放在试管架上，编号，上机检测。 测定 结果审查 报告 7. 参考值 55-85g/L 8 .临床意义： + (1) 血清总蛋白浓度增高 血清中水分减少，而使总蛋白浓度相对增高。凡体内水分的排出大于水分的摄入时，均可引起血浆浓缩，尤其是急性失水时（如呕吐，腹泻，高热等）变化更为显著，血清总蛋白浓度有时可达100-150 g/L。又如休克时，由于毛细血管通透性的变化，血浆也可发生浓缩。慢性肾上腺机能减退患者，由于钠的丢失而致继发性水分丢失，血浆也可出现浓缩现象。 血清蛋白质合成增加。大多发生在多发性骨髓瘤患者，此时主要是球蛋白的增加，其量可超过50 g/L，总蛋白则可超过100 g/L. 血清总蛋白浓度降低 血浆中水分增加，血浆被稀释。如静脉注射过多低渗溶液或各种原因引起的钠潴留。 营养不良和消耗增加。长期食物中蛋白质含量不足或慢性肠道疾病所引起的吸收不良，使体内缺乏合成蛋白质的原料，或因长期患消耗性疾病，如严重结核病，甲状腺机能亢进和肿瘤等，均可造成血清总蛋白浓度降低。 合成障碍，主要是肝功能障碍。肝脏是合成蛋白质的唯一场所，肝脏功能严重损害时，蛋白质的合成减少，以白蛋白的下降最为显著。 蛋白质丢失。严重烫伤时，大量血浆渗出，或大出血时，大量血液的丢失；肾病综合症时，尿液中长期丢失蛋白质；溃疡性结肠炎可从粪便中长期丢失一定量的蛋白质，这些均可使血清总蛋白质浓度降低。 9. 检验方法的局限性： （1）乳糜≤125mg /dl时，对测定结果没有明显干扰。 （2）血红蛋白≤200mg /dl时，对测定结果没有明显干扰。 （3）Vc≤100mg /dl时，对测定结果没有明显干扰。 （4）胆红素≤20 /dl时，对测定结果没有明显干扰。 （5）检测结果与所使用的仪器种类、型号和校准品相关，使用不同的仪器或校准品，检测结果可能会有差异。 10. 产品性能指标： （1）试剂空白吸光度：在波长546nm处，试剂空白吸光度应≤0.200。 　　　　　　 （2）准确度：测定值与靶值的相对偏差应不超过±4%。 （3）分析灵敏度：对应于70g/L的TP所产生