2第二章培养基及配制.ppt

1 无 机 盐 元素名称 添加形式 N KNO3, NH4NO3 大量 P KH2PO4 NaH2PO4 元素 K KCl KNO3 (≥0.5mmol/L) Ca CaCl2 ·2H2O Mg Mg2SO4 · 7H2O S Mg2SO4 · 7H2O Fe FeNa2-EDTA 微量 B H3BO3 元素 Mn MnSO4 (≤ 0.5mmol/L) Cu CuSO4 Mo Na2MoO4 · 2H2O Cl CaCl2 ·2H2O 2.2 肌　醇 促进愈伤组织生长、胚状体和芽的形成 对组织细胞繁殖、分化的促进作用 浓度100 mg/L 3 碳源和能源　 4 植物激素 4.1.生长素类 （1）种类 　 IBA—吲哚丁酸； IAA—吲哚乙酸； NAA—萘乙酸； 2,4-D---2,4-二氯苯氧乙酸 使用效价： IAAIBANAA2,4-D NAA、IBA →生根培养 2,4-D →愈伤组织诱导与增殖 （2）作用　诱导愈伤组织和根分化，促进细胞分裂和伸长。 NAA和IBA常与细胞分裂素结合用于芽的增殖。 （3）浓度　0.05－5mg/L （4）配制 生长素可溶解在稀NaOH中或溶于乙醇。 4.2 细胞分裂素（CTK） （1）种类：Kt---激动素 BAP---苄氨基嘌呤 2－iP---异戊烯腺嘌呤 ZT-玉米素 TDZ （2）作用：启动脱分化、细胞增殖，诱导愈伤组织芽分化、芽增殖，丛生芽。 （3）浓度：0.05－10.0mg/L （4）配制：溶于稀酸或稀碱 CTK＋IAA的结合是实现器官发生很好的配合方式。 eg：快繁技术. 4.3 赤霉素（GAs）　 （1）种类：GA3 （2）作用：促茎伸长，促胚发育成植株；打破休眠；一般在器官形成后加入。 注意：不耐热；生理活性5－15d，时间太长有抑制作用。 较生长素和细胞分裂素少用，可溶于水。 5 琼脂/培养体支持材料 5.1.琼脂 (1)用量 6－10g/L (2)种类 琼脂粉 琼脂条 (3)作用 固化作用 注意：琼脂使用有优缺点；新买应试凝固力。 不凝原因：①pH5不凝；②长时间高压灭菌； ③长期存放，易变质；④厂家不同，杂质含量不同 ⑤配制时融解不充分，分装不均匀； 6辅助性物质 6.4 其它成分： AgNO3 ： 作用：吸附Eth，促进茎芽分化，防玻璃化苗、早衰、落叶；只能短期培养， 用量 1~10mg/L，需过滤灭菌 pH值 在灭菌之前培养基的pH值一般都是调节到5.0-6.0。 一般来说，当pH值高于6.0时培养基将会变硬； 低于5.0时，琼脂不能很好地凝固。 pH值对不同植物的影响会有差异，如玉米胚乳愈伤组织在pH值7.0时鲜重增加最快，在pH值6.1时干重增长最快。 第二节 培养基的制备 1 水和药品 水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少的物质。 配制培养基母液时要用蒸馏水或重蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质。 药品应选取等级较高的化学纯或分析纯； 药品的称量一定要准确、正确，防止药勺之间的交叉污染。 2.1 母液（贮备液，stock solution)配制的目的 （4）母液配制的药品与器材 （5）母液配制（以MS培养基为例）