5.1 DNA粗提取与鉴定.ppt

实验思路 1、DNA从哪提取？ 2、怎样将DNA与细胞中的其他物质分离？ 3、怎样鉴定我们提取的DNA？ 提取DNA的方法 1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 小结 1、DNA的粗提取与鉴定的方法 2、原理 3、实验设计的步骤，原则 * DNA的粗提取与鉴定 1、了解从细胞中提取DNA的基本原理 2、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法 3、观察提取出来的DNA 2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 3.DNA对酶、高温、洗涤剂的耐受性。 4.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 （一）实验材料的选取 材料：新鲜的鸡血 注意： 本实验中，要往鸡血中加入抗凝剂（柠檬酸钠溶液） 原则上只要含DNA的生物材料都可以，但是选取DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。 (1)先将新鲜的鸡血离心，获得鸡血细胞 (2)在鸡血细胞中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 利用了什么原理？ 添加柠檬酸钠，玻棒搅拌 选材如果是洋葱等植物细胞呢？ 先用洗涤剂溶解细胞膜。 洗涤剂食盐作用？ 讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质 答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质 （三）去除滤液中的杂质 讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？ 答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离 方案二利用了酶的专一性；方案三利用了DNA的稳定性。 （四） DNA的析出与鉴定 DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95％），静置2-3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水 1、DNA的析出 2、鉴定 不变蓝 —— 对照组 溶液逐渐 变蓝 丝状物 (DNA) 实验组 图示 结果 加入物质 比较 均加入： ①2mol/LNaCl溶液5 mL ②4 mL二苯胺试剂 鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。 自变量 你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？ 洋葱的鳞片叶表皮细胞 取少许丝状物，置玻片中央， 加1滴甲基绿溶液，丝状物变成绿色。 鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。 用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。 观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备 课题成果评价 （一）是否提取出了DNA 本实验提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质 （二）分析DNA中的杂质 （三）不同实验方法的比较 对于不同的实验方法，本课题可以采用分组的方法进行研究。首先选取不同的实验材料，其次同种材料还可以采用不同方法，从多方面比较实验结果，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺显色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法的效果更好 作业 尝试用植物细胞（如新鲜的菠菜）来做这个实验。 1. 某同学用洋葱进行DNA 粗提取和鉴定实验，操作错误的是( ) A. 加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨 B. 用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的 DNA C. 加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌 D. 加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热 A 2.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA 答：B 1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌” 2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精” 实验小结 整个实验共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，七次搅拌” ①两次蒸馏水 第一次：细胞吸水胀破 第一步 第二次：使 DNA黏稠物析出 第三步 过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层纱布，第一次和