相互作用蛋白质组学唐冬雪辩析.ppt

相互作用蛋白质组学 唐冬雪 2016-06-07 蛋白质是生命过程的真正执行者，蛋白质相互作用与生命健康息息相关。因此，蛋白质互作研究也是基础生命科学的一个重点研究领域. 生物体的生理功能主要由细胞中的蛋白质控制和调节。其中，多数蛋白质是通过与配体结合或是作为蛋白质复合物中的一部分参与细胞的代谢过程。因此，研究蛋白质间的相互作用是理解生命活动的基础。 蛋白质相互作用研究方法 一、酵母双杂交技术 二、免疫共沉淀技术 三、细胞共定位技术 四、GST Pull-down技术 五、FRET（荧光共振能量转移技术） 六、BiFC（双分子荧光互补技术） 七、TAP（串联亲和纯化技术） 八、Far-Western blot（亲和印迹技术） 一、酵母双杂交技术 1. 基本概述 2. 基本过程 3. 应用与优缺点 基本概述 酵母双杂交系统( Yeast two-hybrid system,Y2H)是1989年由Fields等提出并初步建立的,主要用于研究真核生物的蛋白质。 该系统利用了酵母的转录激活因子GAL4，含有的两个结构域，DNA结合域(DNA binding domain,BD)及转录激活域(activation domain,AD)，将已知基因（诱饵基因）和靶基因分别构建在含BD及AD质粒载体上，将两种质粒共同转化酵母感受态细胞，若BD结合的诱饵蛋白能够与AD结合的靶蛋白或文库中的