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倒置显微镜技术发展趋势 　　摘 要 随着社会的快速发展，我国的科研技术也逐渐趋向成熟，其中，倒置显微镜技术是近年来一种新型的显微镜操作技术。倒置显微镜技术是指在高倍复式显微镜下，采用一种可以控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置（即显微操作器）对细胞或早期胚胎进行操作的一种技术方法，主要在免疫学、细胞学、遗传工程学、肿瘤学、寄生虫学、工业微生物学、植物学等各个领域被广泛使用。在此背景下，本文将对倒置显微镜技术的具体操作和特点进行叙述，然后探究其在各个领域的具体应用，并对倒置显微镜技术的发展趋势进行分析。 　　关键词 倒置显微镜；应用领域；发展趋势 　　中图分类号 TH7 文献标识码 A 文章编号 1674-6708（2016）166-0148-02 　　20世纪80年代以来，我国光学显微镜的设计发生了很大的进展，在其制作上，越来越注重实用性。为了改进光学显微镜的多功能方面，采用组合方式的装配设计集普通光镜加相差、暗视野、荧光、DIC、摄影装置于一体，使光学显微镜在使用中操作方便且灵活[1]。倒置显微镜与此原理相同，也是结合其他技术达到使用功能的目的，根据倒置显微镜的用途可以分为生物倒置显微镜、偏光倒置显微镜、金相倒置显微镜、荧光倒置显微镜等种类，从而在诸多领域被广泛使用。根据其使用功能特点，我们可以看出倒置显微镜技术具有极其宽阔的发展前景。 　　1 倒置显微镜技术的原理和具体操作 　　1.1 倒置显微镜技术的结构原理 　　倒置显微镜的结构主要由机械、光学和照明3个部分组成，每部分的功能组成都不相同，接下来我们将对其进行详细介绍。 　　首先，在机械部分，与普通光学显微镜相似，主要有镜座、镜臂、观察镜筒、物镜转换器、载物台以及调节器（包括粗螺旋和细螺旋）组成，在倒置显微镜中有着不用的功能作用，例如，镜座是用以支持整个镜体的一个底座；镜臂是在取放显微镜的时候用来手握的部位；物镜转换器是可以调换不同倍数物镜的结构；载物台用以放置玻片标本；调节器是调节标本与物镜相对位置的装置。 　　然后，光学部分主要包括目镜和物镜。区别于正置显微镜的是，倒置显微镜的物镜在观察用品的下方，有4～6个，其中，刻有“10×”符号的物镜较短，为低倍镜，刻有“40×”符号的较长，为高倍镜，最长的是刻有“100×”符号的油镜[2]。而且，在油镜和高倍镜上经常会有一圈颜色不同的线，以示区别。目镜装在镜筒的上端，目镜上面分别刻有5×、10×、15×，表示其放大倍数，10×的目镜较为常用。另外，显微镜的放大倍数是目镜放大倍数和物镜放大倍数的乘积，如物镜为10×，目镜为15×，其放大倍数就为10×15=150。 　　最后，照明部分分为透反射2种，透射式照明在载物台的上方，提供明场、相衬、诺马斯基干涉相衬等显微术的照明；反射式照明安装在物镜的下方，提供荧光观察、金相的明暗场观察、偏振光观察等；随着高分辨成像技术的发展，研究级的倒置显微镜还配置了3～4个的外接照明端口，用于激光共聚焦、荧光漂白后恢复等模块照明；通常倒置显微镜的照明系统均采用科勒照明，使均匀度达到80%以上。聚光器（集光器）的主要作用则是光线集中于所要观察的标本上，其由聚光镜和光圈2部分组成，位于镜台下方的集光器架上[3]。 　　1.2 倒置显微镜技术的具体操作 　　在倒置显微镜操作中，最常用的观察方法是相差。这种方法在观察活细胞和微生物的时候不需要染色，是一种比较理想的观察方法。在此基础上，提供各种聚光器来满足需要，可以观察到具有高对比度和对比度的自然背景颜色图像。以下我们叙述一下倒置显微镜的具体操作流程。首先接连电源开机，打开镜体下方的电控开关。在使用的之前，先把要观察的对象放在载物台上，转动转换器，选择物镜，然后进行观察，调节铰链式双目目镜到舒适的状态为止，接下来开始推拉调节镜下的亮度调节器至适宜光源状态，再调节聚光镜下面的光阑，调节光源大小。下一步是调节像距，即转动物镜转换器选择合适倍数的物镜和目镜的同时，调节升降来减小或消除图像周围的光晕，从而提高图像的衬度。下一步就可以直接通过目镜进行观察了，在观察过程中可以调整载物台，选择想要观察视野。最后一步是关机：取下观察对象，使用光源亮度调节器把光线调至最暗；然后关闭镜体下方开关，断开电源，转动物镜转换器，把物镜镜片置于载物台下侧。 　　2 倒置显微镜技术的主要特点和应用 　　2.1 倒置显微镜技术的主要特点 　　根据倒置显微镜的结构分析和具体操作，我们可以发现倒置显微镜组成与普通显微镜相似，但其物镜与照明系统颠倒，倒置显微镜在观察培养的活细胞的时候，具有相差物镜。倒置显微镜和放大镜起的作用是相同的，就是把近处的一个微小物体放大成一个在人眼视力中清晰的图像，但是，倒置显微镜比放大镜的放大率更高。除了此特点，倒置显微镜