第23章临床酶学检验的原理和方法学案.pptVIP

第二十三章  临床酶学检验的原理和方法 一、酶促反应进程 酶促反应动力学参数 1.初速度(initial velocity)指在反应最初阶段底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度，用v0来表示 2.最大反应速度(maximum velocity)指当酶的结合位点与底物结合饱和时的反应速度，通常用V或Vmax来表示 3.米氏常数（Michaelis constant，Km）指酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位同底物浓度 酶促反应 延滞期 lag phase 线性 linear phase 非线性期 non-linear phase 零级反应 一级反应 二、定时法 酶活性浓度测定方法 酶活性浓度：用反应速度反映酶浓度[E]，要求酶促反应的初速度（v）达到最大速度Vmax，此时两者之间存在线性关系。 按反应时间分类：定时法和连续监测法 按检测方法分类：量气法、分光光度法、荧光法、 放射性核素法、离子选择电极法，旋光法、极谱法、HPLC或生物发光法等。 （一）概念 主要优点 设备简单，操作方便，检测过程中无需恒温设备，用分光光度计即可测定，也不用考虑显色剂对酶活性的影响，是早期常用方法。 主要缺点 确定选定的反应时间是否处于线性期。 （三）计算 酶活性浓度的计算公式 摩尔吸光系数 ? 和系数 K 均为常数， ?