《大学化学教学课件》12 分光光度法.pptVIP

* 仪器 可见分光光度计 * * 第十二章 可见分光光度法和 分光光度法是根据物质的吸收光谱及光的吸收定律，对物质进行定性、定量分析的一种分析方法。 分光光度法 可见分光光度法（380-780nm） 紫外分光光度法（10-380nm）（常用200-380nm） 红外分光光度法（780nm-3?105nm） 重要特点： 灵敏度高，适用于微量和痕量分析。 相对误差一般为2%—5%。 紫外分光光度法 * 教学要求 1.了解分光光度法的特点、原理和基本概念。 2.掌握Lambert-Beer定律的数学表达式，能熟练利用该式进行有关计算。 3.了解分光光度法测定条件的选择。 4.了解分光光度法的误差来源。 5.掌握吸收曲线和标准曲线的绘制方法及其应用。 6.掌握分光光度法的有关应用。 7.熟悉分光光度计的主要组成部件及其作用。 * §12.1 物质的吸收光谱 一、物质对光的选择性吸收 当一束光照射到某物质或某溶液时，组成该物质的分子、原子或离子等粒子接受光的能量，使这些粒子中的电子由低能量的轨道跃迁到高能量轨道，也就是说：由基态转变为激发态。 M（基态）+ hν M*（激发态） 这个过程就是物质对光的吸收。 由于分子、离子或原子的能级是量子化的，只有光子的能量（hν）与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差（ΔE）相等时，才能被吸收。 * 单色光 复合光 光的互补 单一波长的光 由不同波长的光组合而成的光 若两种不同颜色的单色光按一定的强度比例混合得到白光，那么就称这两种单色光为互补色光，这种现象称为光的互补。 蓝 黄 紫红 绿 紫 黄绿 绿蓝 橙 红 蓝绿 单色光、复合光、光的互补 * 完全吸收 完全透过 吸收黄色光 光谱示意 物质的颜色与光的关系 表观现象示意 复合光 物质对光的吸收 * 二、物质的吸收光谱 测量该溶液对不同波长(λ)的单色光的吸收程度，即吸光度A（absorbance）。 以波长λ为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，可得一条曲线，即为吸收光谱或称为吸收曲线。 不同波长(λ)的单色光依次通过 有色溶液 波长 λ1 λ2 λ3 λ4 吸光度 A1 A2 A3 A4 图12-2三（邻二氮菲）合铁（?）离子的吸收光谱 * 吸收光谱中，吸光度最大处的波长为最大吸收波长，用“ λmax ”表示。 若在最大吸收波长处测定吸光度，灵敏度最高。 λmax是定性分析的依据；而溶液的浓度越大，吸光度A越大，是进行定量分析的依据。 图中λmax为508nm，说明溶液最容易吸收的波长为508nm附近的光（绿色），所以溶液呈现绿色光的补色-紫红色。 * § 12-2 分光光度法基本原理 一、透光率和吸光度 均匀的有色溶液 单色光 Io Ia It Ir为反射光强度 I0 = Ia + It + Ir 空白溶液 被测溶液 I0 = Ia + It 加空白消除影响，上式可简化为： Io为入射光强度 Ia为吸收光强度 It为透过光强度 * 透射光的强度 It 与入射光的强度 I0 之比称为透光率（transmittance）用符号“T”表示 T 越大，溶液对光的吸收就越少； T 越小，溶液对光的吸收就越多。 透光率的负对数称为吸光度，用符号“A”表示。 A越大，溶液对光的吸收就越多。 * 二、Lambert-Beer定律 Lambert定律：当一适当波长的单色光通过一固定浓度的溶液时，其吸光度与液层厚度成正比。 A = k1b 式中：b为液层厚度； k1为比例系数。 Beer定律：当一适当波长的单色光通过一液层厚度固定的溶液时，其吸光度与溶液的浓度成正比。 A = k2c 式中： C为物质的量浓度或质 量浓度；k2为比例系数。 * 将以上两式合并得： A = εbc （Lambert-Beer定律数学表达式） 式中：b的单位为cm；c为物质的量浓度（mol/L）； ε为摩尔吸光系数，单位为L·mol-1·cm-1。 若用质量浓度 ?（g·L-1）代替物质的量浓度c， Lambert- Beer定律可表示为： A = ab? 式中：a为质量吸光系数，单位为L·g-1·cm-1。 a和ε可以相互换算： εbc = ab? εc = a? ε =a× ? /c =aM * 比吸光系数：是指100mL溶液中含被测物质1g，液 层厚度b为1cm时的吸光系数值，用 表示。 如果溶液中同时存在两种或两种以上对光有吸收的物质，在同一波长下只要共存物质不相互影响