3细胞生物学方法课稿.ppt

第三章 细胞生物学研究方法 第一节 细胞形态结构的观察方法 一、光学显微镜技术 第二节 细胞组分的分析方法 用离心分离技术分离细胞组分 特异蛋白的定位与定性 细胞内特异核酸的定位与定性 定量细胞化学分析技术 利用物理或化学方法，对细胞组分进行定位、定性、定量分析。 一、超速离心分离细胞器、生物大分子及其复合物 二、特异蛋白的定位、定量与定性 蛋白电泳(SDS)与免疫印迹反应(Western-Blot)（间接定位）:可相对定量。 与差速离心法分离细胞组分结合。 免疫荧光技术（直接定位）： 快速、灵敏、有特异性。可用普通荧光显微镜或共焦显微镜观察、拍照。 四．定量细胞化学分析技术 ?细胞显微分光光度术(测量OD值） 利用细胞内某些物质对特异光谱的吸收，测定这些物质（如核酸与蛋白质等）在细胞内的含量。 包括：紫外光显微分光光度测定法（OD260、280） 可见光显微分光光度测定法（OD600） 根据OD值计算DNA浓度（ug／mL）。公式如下：单链 DNA ［ssDNA］＝33×OD260 ×稀释倍数双链 DNA ［dsDNA］＝50×OD260×稀释倍数单链 RNA ［ssRNA］＝40×OD310×稀释倍数 ? 流式细胞仪（Flow Cytometry） ?主要应用： 定量测定细胞中的DNA、RNA或某一特异