氨苄西林诱导大肠杆菌内毒素释放体外研究实验.docVIP

氨苄西林诱导大肠杆菌内毒素释放体外研究实验 　　摘 要：细菌内毒素是革兰氏阴性菌的细胞壁成分，当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。本文对氨苄西林诱导大肠杆菌内毒素释放进行体外研究实验。实验结果表明氨苄西林确实能够诱导内毒素的释放。 　　关键词：氨苄西林；毒素；实验 　　氨苄西林为广谱半合成青霉素，抗菌谱与青霉素相似，对肠球菌及李斯特菌的作用则优于苄青霉素[1-3]。细菌内毒素是G-菌细胞壁个层上的特有结构，内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。本文对氨苄西林诱导大肠杆菌内毒素释放进行体外研究实验。 　　1 实验方法 　　1.1 空白培养基内毒素含量的检测将配制的灭菌培养基以内毒素检验用水做1：10、1：100、1：1000、1：10000稀释，按中国药典2010年版《细菌内毒素检查法》鲎试剂凝胶法检测内毒素含量。 　　1.2 不同浓度氨苄西林诱导大肠杆菌内毒素的释 　　放实验取培养18h的形态正常、生长状态良好的大肠杆菌，分别加入浓度为5微克/毫升、10微克/毫升、20微克/毫升、40微克/毫升、80微克/毫升、100微克/毫升、200微克/毫升、400微克/毫升的氨苄西林溶液，37摄氏度、150转培养2小时，取大约8×106个/ml浓度的大肠杆菌培养液，以内毒素检验用水作1：16*104、1：32*104、1：64*104、1：100*104稀释，按中国药典2010年版《细菌内毒素检查法》鲎试剂凝胶法检测内毒素含量。 　　1.3 不同培养时间氨苄西林诱导大肠杆菌内毒素的释放实验 　　取培养18小时的形态正常、生长状态良好的浓度约为8×106个/ml的大肠杆菌培养液，在氨苄西林浓度为200微克/毫升、37摄氏度、150转条件下，继续培养0小时、2小时、4小时、6小时、8小时，以内毒素检验用水1：5*105、1：6*105、1：7*105、1：8*105、1：9*105、1：10*105稀释，按中国药典2010年版《细菌内毒素检查法》鲎试剂凝胶法检测内毒素含量。 　　2 结果 　　2.1 空白培养基内毒素含量的检测稀释100倍的空白培养基呈阳性结果，稀释1000倍的空白培养基呈阴性结果。 　　2.2 不同浓度氨苄西林诱导大肠杆菌内毒素的释放 　　氨苄西林浓度为每毫升5微克在培养液稀释倍数为16*104实验结果为阴性，培养液稀释倍数为32*104实验结果为阴性，培养液稀释倍数为64*104实验结果为阴性，培养液稀释倍数为100*104实验结果为阴性；氨苄西林浓度为每毫升10微克在培养液稀释倍数为16*104实验结果为阴性，培养液稀释倍数为32*104实验结果为阴性，培养液稀释倍数为64*104实验结果为阴性，培养液稀释倍数为100*104实验结果为阴性；氨苄西林浓度为每毫升40微克在培养液稀释倍数为16*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为32*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为64*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为100*104实验结果为阳性；氨苄西林浓度为每毫升80微克在培养液稀释倍数为16*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为32*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为64*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为100*104实验结果为阳性；氨苄西林浓度为每毫升100微克在培养液稀释倍数为16*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为32*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为64*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为100*104实验结果为阳性；氨苄西林浓度为每毫升200微克在培养液稀释倍数为16*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为32*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为64*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为100*104实验结果为阴性；氨苄西林浓度为每毫升400微克在培养液稀释倍数为16*104实验结果为阳性，培养液稀释倍数为32*104实验结果为阴性，培养液稀释倍数为64*104实验结果为阴性，培养液稀释倍数为100*104实验结果为阴性。实验结果表明氨苄西林浓度为20微克/毫升至400微克/毫升范围内都可诱导内毒素的释放，20微克/毫升至200微克/毫升时诱导作用最强。 　　2.3 不同培养时间氨苄西林诱导大肠杆菌内毒素的释放 　　培养液稀释倍数为5*105培养时间为0小时实验结果为阳性，培养时间为2小时实验结果为阳性，培养时间为4小时实验结果为阳性，培养时间为6小时实验结果为阳性，培养时间为8小时实验结果为阳性；培养液稀释倍数为6*105培养时间为0小时实验结果为阳性，培养时间为2小时实验结果为阳性，培养时间为4小时实验结果为阳性，培养时间为6小时实验结果为阳性，培养时间为8小时实验结果为