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湖北野生桑黄分离鉴定及培养研究 　　摘要：采用子实体组织分离法对桑黄（Inonotus sanghuang）进行分离，采用内转录间隔区序列分析对样品进行分子鉴定。用桑叶提取物对桑黄进行培养。结果表明，不同浓度桑叶提取物对桑黄生长存在不同程度的影响，最佳添加浓度为0.5%。在基础PDA培养基中添加0.5%桑叶提取物，桑黄生长速度为3.5 mm/d，与基础PDA培养基存在极显著差异。液体培养，菌丝体生物量达到11.7 g/L。桑叶提取物对桑黄菌丝体生长具有一定的促进作用。 　　关键词：桑黄（Inonotus sanghuang）；桑叶提取物；生长速度；液体培养 　　中图分类号：S567.3+9；S646.1+9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）12-3154-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.12.037 　　Abstract： Inonotus sanghuang was isolated by sub entity organization isolation method. It was identified by sequence analysis method of internal transcribed sequence and cultured with mulberry leaf extract. The results showed its growth was affected by different concentrations of mulberry leaves extract， and the best adding concentration was 0.5%. Based on conventional solid medium， which was added 0.5% mulberry leaf extract， its growth rate was 3.5 mm/d. There was a very significant difference between the control group and the control group. The biomass of mycelium was 11.7 g/L， and the liquid medium was used. Mulberry leaf extract has a certain role in promoting the growth of Inonotus sanghuang. 　　Key words： Inonotus sanghuang； mulberry leaf extract； growth rate； liquid culture 　　桑黄（Inonotus sanghuang）俗称桑臣、桑耳或胡孙眼等，是寄生于桑树等阔叶树上的一种多年生珍贵药用真菌，《神农本草经》、《本草纲目》等均有记载，有“森林黄金”的美称。桑黄含有多种活性物质，如多糖、黄酮和三萜类物质。研究显示，桑黄多糖能促使肿瘤细胞自我毁灭，防止肿瘤细胞附着于体内并抑制转移，抑制率达96.78%，是国际公认的最有效的抗癌真菌，其突出的抗肿瘤功效在日韩等国备受关注，具有极大的药用价值和开发潜力[1]。不同树种桑黄活性物质含量差异较大，以桑树桑黄含量最高[2-4]。 　　中国野生桑黄主要分布在东北、华北、西北及四川、云南等地。本课题组首次在湖北省内采集到野生桑树桑黄，对其进行分离鉴定，研究桑叶提取物对桑黄生长的影响，为下一步人工栽培研究奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　野生桑树桑黄由本课题组于2015年4月从湖北西部山区桑树上采集得到，系湖北省内首次发现。桑叶提取物（MLE）：取鲜桑叶，60 ℃烘干，取烘干桑叶500 g，加1 500 mL沸水浸提30 min，过滤，浓缩烘干提取液，得MLE。马铃薯葡萄糖（PDA）培养基：马铃薯200 g，去皮切丁，沸水煮20 min，取滤液，加葡萄糖20 g，加热溶解，补足水1 000 mL，pH自然。葡萄糖蛋白胨培养基：葡萄糖20 g，蛋白胨5 g，水 1 000 mL，pH自然。MLE培养基：取一定量MLE，加水加热溶解，pH自然。PDA-MLE培养基：取PDA培养基，加入一定量MLE，加热溶解，pH自然。 　　1.2 仪器与试剂 　　Thermo Sorvall Biofuge Primo R型高速冷冻离心机（美国Thermo公司）；TaKaRa TP600型PCR仪（日本TaKaRa公司）；Applied Biosystems 3730-XL型测序仪（美国Applied B