第七章基因结构与表达分析的基本策略.DOC-中南大学在线课程平台.docVIP

中南大学生物科学与技术学院 分子生物学研究中心 教 案 授课科目: 授课内容:授课对象：临床医学年制年制授课时数：学时授课：授课地点：授课时间：多媒体教学多媒体课件 图7-1 ATP、dATP和ddATP的结构示意图 图7-2 DNA合成反应模式图 末端终止法：在DNA合成反应体系中，除含有正常脱氧核苷三磷酸底物外，还加入少量的双脱氧核苷三磷酸(ddNTPs)特殊底物，由于这种底物的5′-磷酸基团是正常的，能够替代相对应的脱氧核苷三磷酸而与引物延伸链的3′羟基连接，进入部分新合成链；但由于这种特殊底物不存在3′羟基末端，故下一个核苷酸底物不能通过5′-磷酸基团与之形成3′,5′-磷酸二酯键，从而导致DNA新链的延伸提前终止于这一“异常”核苷酸处，而掺入的双脱氧核苷三磷酸则位于DNA延伸链的最末端（图7-3） 然而 图7-3 末端终止部位示意图 （二）主要步骤 1.单链DNA模板的制备。 2.DNA模板与测序引物退火。 3.掺入法标记反应。 4.延伸-终止反应。 图7-4 测序反应的基本原理和过程 5．变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。 6. 放射自显影。 7.阅读测序结果。 图7-5 末端终止测序反应产物电泳区带放射自显影 二、化学降解法（自学为主） 化学降解法是建立在对原有DNA的化学降解过程基础之上的。 （一）基本原理 在化学降