高效液相色谱法测定八爪金龙及组方制剂中岩白菜素的含量.docVIP

高效液相色谱法测定八爪金龙及组方制剂中岩白菜素的含量 　　摘要：为测定八爪金龙及其组方制剂开喉剑中的有效成分岩白菜素，研究建立高效液相色谱（HPLC）法，以甲醇∶水（25∶75，V/V）为流动相，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃，检测波长274 nm。结果表明，溶液中岩白菜素在0.585 6～58.560 0 μg/mL时有良好的线性关系（r=0.999 5），平均回收率为103.17%，RSD为0.28%，该方法操作简单、稳定、准确、可行，可用于开喉剑及组方药材八爪金龙中岩白菜素的含量测定。 　　关键词：八爪金龙；开喉剑喷雾剂；岩白菜素；高效液相色谱 　　中图分类号：O657.7+2；R284.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）01-0186-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.01.049 　　八爪金龙[Ardisia crispa （Thunb.） A. DC.]又名百两金、八爪龙、八爪根、铁雨伞、高八爪、开喉箭（四川），主要分布在湖北、四川、贵州、江西、广西等地。为紫金科植物百两金或矮茎朱砂根的根茎或全草，《贵州草药》有记载，称其辛微苦涩，平，能清热，利咽化瘀，对慢性咽炎有较好疗效，被苗族奉为喉科良药，清热排湿，消肿止痛，为贵州民间常用的治疗咽喉的中草药，具有明显的抑制甲型流感病毒作用，能显著抑制革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的生长，对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、枯草杆菌、变形杆菌抑制作用更为明显，具有明显抗炎、镇痛和解热作用。岩白菜素（Bergeninum）是八爪金龙的成分之一，属于异香豆素类化合物，具有良好的镇咳、祛痰、抗炎、护肝、抗病毒和神经保护作用[1]，选择岩白菜素类型的药物活性成分作为八爪金龙质量控制指标具有科学意义和应用前景。开喉剑喷雾剂由八爪金龙、山豆根、蝉蜕、薄荷脑等4味药材组成，具有清热解毒、消肿止痛的功效。已有对各种中药如小儿止咳颗粒、喘胶囊、复方矮地茶片、虎耳草、岩白菜等的岩白菜素含量的测定的报道[2-11]，但鲜有对八爪金龙和开喉剑喷雾剂中的岩白菜素的超声提取及定量分析的研究报道。本研究采用超声提取八爪金龙和开喉剑喷雾剂中的岩白菜素，并用高效液相色谱（HPLC）法测定其含量。 　　1 材料 　　1.1 测试样品 八爪金龙，产地广西桂林；开喉剑喷雾剂，贵州三力制药有限责任公司提供。 　　1.2 仪器 LC2000D型高效液相色谱仪，CQ-100B-ST型超声提取器，玻璃砂芯过滤装置（FD.JH.JS），HZY-A200型电子天平。 　　1.3 试剂 甲醇为色谱纯，水为经0.45 μm微孔滤膜滤过的纯化水，岩白菜素对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号111532。 　　2 试验方法 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱型号Luna-5u-c18（2）-100A（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱温30 ℃，流动相甲醇∶水（25∶75，V/V），流速1.0 mL/min；检测波长274 nm。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称取适量岩白菜素对照品，置于25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，摇匀，稀释，配置成0.732 mg/mL的溶液，测得色谱见图1（A）。 　　2.3 样品溶液的制备 　　八爪金龙粉末0.40～0.45 g，开喉剑溶液2.00～2.10 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，放置30 min，超声波处理40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤。 精密量取续滤液5 mL，置于10 mL容量瓶中加甲醇至刻度，摇匀。与原续滤液分别置样品瓶贴标签、密封保存。取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试液样品。HPLC分离后的色谱见图1（B、C）。 　　2.4 方法考察 　　2.4.1 线性关系的考察 量取上述对照品溶液0.06、0.08、0.20、0.40、1.00、2.00、4.00 mL置于25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成浓度为0.585 6，2.928，5.856，29.28，58.56 μg/mL岩白菜素对照品溶液，分别进样10 μL。以岩白菜素浓度（μg/mL）为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y）进行线性分析，得到回归方程为y=25.79x+548.79，R2=0.999 5。结果表明，岩白菜素在0.585 6～58.56 μg内有良好的线性关系。 　　2.4.2 稳定性试验 精密称取八爪金龙0.410 g，开喉剑2.010 g，按照样品溶液制备的方式制备溶液，每次进样10 μL，共5次，时间间隔分别为0、1、2、4、8 h，记录峰面积值。5次岩白菜素含量测定值基本不