高效液相色谱法测定酸降解右旋糖酐含量方法研究.docVIP

高效液相色谱法测定酸降解右旋糖酐含量方法研究 　　【摘 要】建立了一种采用酸降解法测定右旋糖酐含量的方法，含量在0.5mg/ml～1.5mg/ml，线性良好A=190878C-4513.7，相关系数：R= 0.9998。平均回收率达99.9%，RSD=0.35（n=9），供试液24h稳定。该方法用于右旋糖酐的含量测定回收率高，精密度好，可行性高。 　　【关键词】右旋糖酐 葡萄糖 含量 　　右旋糖酐（dextran）又名葡聚糖， 是若干葡萄糖脱水形成的聚合物[1]，目前右旋糖酐含量的测定主要是通过高效液相色谱法（HPLC）测定其不同分子量与浓度之间的关系，进而测定其中不同分子量的含量[2，3]，对于单一分子量的右旋糖酐尚未有方法。本文结合公司产品（右旋糖酐为主要原料）特性建立了一种新的右旋糖酐含量测定的方法，产品经硫酸破坏，右旋糖酐水解转变为葡萄糖[4]，加碳酸钡调节合适的pH，取上清液经HPLC-示差折光检测器分析测定，可定量测定右旋糖酐的含量，该方法回收率高，精密度好，具有一定的可行性。 　　1实验部分 　　1.1 设备及试剂 　　高效液相色谱仪（安捷伦）；右旋糖酐（GE）；葡萄糖标准品（标准品，中国食品药品检定研究院）；浓硫酸（优级纯，国药集团）；碳酸钡（分析纯，国药集团）。 　　1.2 色谱条件 　　色谱柱型号：C18 SPE柱；柱温：30℃；流动相：乙腈：水（75：25，v/v）；流速：1.0ml/min。 　　2 方法研究 　　2.1 硫酸浓度的选择 　　称取右旋糖酐原料0.2g，置20mL具塞试管中，分别加入9.8ml 的0.5mol/ml、1.0 mol/ml、2.0 mol/ml硫酸溶液，沸水浴中水解2h令右旋糖酐完全水解，完全水解后加入一定量的碳酸钡粉末中和至pH 6～7，10000r/min离心5min，取上清液，过0.45um微孔滤膜，进液相色谱分析，结果右旋糖酐的平均回收率分别为75.4%、95.8%、95.5%，使用2.0 mol/ml硫酸溶液时因硫酸浓度大，需要的碳酸钡量较多，使得最终的样液较少，不易实验进行。故选择1.0 mol/ml硫酸溶液水解。 　　2.2 水解时间的选择 　　称取右旋糖酐原料0.2g，置20mL具塞试管中，分别加入9.8ml的1.0 mol/ml硫酸溶液，沸水浴中水解1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h，完全水解后加入一定量的碳酸钡粉末中和至pH 6～7，10000r/min离心5min，取上清液，过0.45um微孔滤膜，进液相色谱分析，结果右旋糖酐水解时间为3h，平均回收率达最大为99.2%，，时间过长，溶液颜色变黄，峰形变化，不易定量。故选择水解时间为3h。 　　2.3线性范围及相关系数 　　精密称取葡萄糖标准品50mg于10mL容量瓶，加入纯化水制备成5mg/ml对照品溶液贮备液。再稀释至浓度为1.5mg/mL、1.2mg/mL、1.0mg/mL、0.8mg/mL、0.5mg/mL的标准溶液。根据实验测得的峰面积与配制的对照品溶液浓度作标准曲线。其线性方程为 y=190878x-4513.7，相关系数：R= 0.9998。 　　2.4 回收率实验 　　模拟产品组成，取右旋糖酐原料分别加入已制备好的空白试液内，配制成三种不同浓度溶液1.2mg/ml、1.0mg/ml、0.8mg/ml各3份，按已确定的方法处理分析，计算回收率平均值和相对标准差。 　　2.5重复性试验 　　取同一批样品6份，制备供试品溶液，按上述方法外标法测定，结果平均含量为标示量的99.6%，（RSD=1.53%，n=6）。 　　2.6耐用性 　　将供试溶液分别放置2h、4h、8h、24h后，按上述方法，测定其峰面积，平均峰面积为224520，RSD=0.35%，结果表明溶液放置24h稳定。 　　2.7 样品分析 　　精密称定供试品0.2g，置20mL具塞试管中，加入9.8ml 1.0mol/硫酸溶液，沸水浴中水解3h令右旋糖酐完全水解，完全水解后加入一定量的碳酸钡粉末中和至pH 6～7，10000r/min离心5min，取上清液，过0.45um微孔滤膜，按液相色谱条件进样分析，并与产品标示含量（50mg/ml）相比较。 　　3 讨论 　　产品中右旋糖酐经硫酸水解，碳酸钡调节pH，离心取上清液经HPLC-RID分析测定含量，方法线性良好，回收率高，精密度高，为产品中右旋糖酐含量的测定提供了一种可行的方法。 　　参考文献： 　　[1]张洪斌，姚日生，朱慧霞.发酵法生产右旋糖酐的工艺研究[J].合肥工业大学学报，2004，27（7）：783-786. 　　[2]赵峰辉，李新图，陈建中等.HPLC法测定右旋糖酐20氯化钠注射液的含量[J].论著