血液学及检验实验教学笔记.docVIP

实验十三 自溶+纠正、高铁血红蛋白还原试验、Coomb’s试验 实验一 自身溶血试验及其纠正试验 autohemolysis test and correcting test 【目的】 掌握自溶+纠正、高铁血红蛋白还原试验、Coomb’s试验的 方法及结果判断及临床应用。 原理： 器材和试剂： （1）无菌0.556mol/L（100g/l）葡萄糖液 （2）无菌N.S （3）1g/l肝素水溶液 （4）氰化高铁Hb转化液 （5）无菌小瓶（5ml），内加0.3ml肝素，50℃烘干灭菌 （6）无菌注射器和吸管 步骤和方法 （1）试管中加葡萄糖20mg，109mol/L枸橼酸钠液0.2ml，血1.8ml。 （2）125g离心5min，调血细胞∶血浆为1 ∶1。 （3）取抗凝血1ml，加亚硝酸钠葡萄糖混合液和亚甲蓝各0.5ml， 混匀，37℃水浴3h。 （4）取血0.1ml，加磷酸盐缓冲液10ml，2min后，635nm比色得吸 光度为SA。 （5）用未加亚硝酸钠葡萄糖血，做上步试验，得吸光度为B。 4. 临床意义： 正常人：应＞75%； 杂合子：多在74～31%； 纯合子：多＜30%。 5. 注意事项： RBC比积＜30%时，还原率显著下降，故需调整血细胞和血浆比。 以ACD作抗凝剂时，其与血液之比为1：9，过量则pH下降。 一般要求St比B大8倍以上。 不稳定Hb易被氧化造成假阳性。 实验二 高铁血红蛋白还原试验 methemogobin reduction test MHb-RT 1. 原理： 当RBC内G6PD含量正常时，由磷酸戊糖代谢途径生成的NADPH可作为MHb的还原酶的辅酶，在美蓝的参与下，MHb被还原成Hb。如G6PD缺乏，还原速度减慢，或不能还原。通过测定还原速度间接反应G6PD的活性。 2. 器材与试剂 （1）亚硝酸钠和葡萄糖混合液 （2）亚甲蓝 （3）磷酸盐缓冲液 3． 方法及计算： （1）试管中加葡萄糖20mg，109mol/L枸橼酸钠液0.2ml，血1.8ml。 125g离心5min，调血细胞∶血浆为1 ∶1。 （2）取抗凝血1ml，加亚硝酸钠葡萄糖混合液和亚甲蓝各0.5ml，混匀，37℃水浴3h。 （3）取血0.1ml，加磷酸盐缓冲液10ml，2min后，635nm比色得吸光度为SA。 （4）用未加亚硝酸钠葡萄糖血，做上步试验，得吸光度为B。 4. 参考值： 正常人：应＞75%； 杂合子：多在74～31% 纯合子：多＜30%。 5.注意事项： RBC比积＜30%时，还原率显著下降，故需调整血细胞和血浆比。 以ACD作抗凝剂时，其与血液之比为1：9，过量则pH下降。 一般要求St比B大8倍以上。 不稳定Hb易被氧化造成假阳性。 3. 临床意义：设问 实验三 抗人球蛋白试验Coombs test 原理：不完全抗体（IgG）在盐水介质中不能使RBC凝集，只附着在RBC上（致敏RBC），此种抗体是人类球蛋白，如果用家兔抗人球蛋白加入，可使致敏RBC发生凝集。用于检测体内不完全抗体的试验。有间接和直接试验两种。 方法与步骤 间接抗人球蛋白试验：检查血清中的不完全抗体 管号 P D d 待测患者血清 2滴 ? ? 10%OD-RBC 1滴 1滴 ? 抗D血清 ? 1滴 1滴 10%Od-RBC ? ? 1滴 混匀，37℃水育1h，8～10倍生理盐水洗涤3次以上，留压积RBC，加抗人球蛋白血清1滴，转动试管混匀，观察结果。 P管凝集：血清中含有不完全抗体。如检查孕妇血清中有无不完全抗体。 直接抗人球蛋白试验：检查RBC上的不完全抗体 临床意义：C上含有不完全抗体。如检测新生儿脐血RBC上有无来自母体的抗体。 实验小结： 实验十四 血小板功能试验，PF3aT试验检测 一、血小板粘附试验（platelet adhension test，PAdT ） 常用方法：玻球法、玻璃滤器法、玻柱法 [原理] BPL可粘附于带负电荷的非生理性物质表面如金属、玻璃等→血液在特制的玻球内转动，BPL可粘附于玻璃球内表面→故血液在玻球内转动后BPL数↓→比较转动前后血液中BPL数可了解BPL粘附功能 。 [器材、试剂] 玻球、转动装置、显微镜、牛鲍计数板、枸橼酸盐抗凝剂、血小板稀释液等。 [操作] 取血1.8ml＋0.2ml枸橼酸→加入玻球→旋转3rpm/min×15min 计数粘附前后血小板数，算出粘附率。 [临床意义] 1、PAdT增高：见于血栓前状态和血栓性疾病。 2、PAdT减低：见于血管性血友病、巨大BPL综合征、BPL无力症、尿毒症、异常蛋白血症、 MDS、AL等。 [参考值] 45.34%～79.78% 二、血小板聚集试验（platele