1.PCR原理课件.pptVIP

PCR扩增反应的精确性 脱氧三磷酸核苷酸（dNTPs） 无扩增产物 巢式PCR（Nest-PCR） 递减PCR（TouchDown PCR） 热启动PCR （HotStart PCR） 使用PCR增强剂 脱氧三磷酸核苷酸（dNTPs） dNTPs的标准使用范围：20 - 200 mM 特异性的改进：降低dNTPs的浓度，但要注意Mg+2的摩尔浓度 有效性的改进：对于较大分子量的模板，应适当提高dNTPs的量 如果一种dNTP的浓度过高，它就会优先掺入到延长链中，造成 扩增产物的不准确，因此要保持四种dNTPs的一致。此外，保 持四种dNTPs的浓度略高于DNA聚合酶对各种dNTPs的Km值也 很重要（10-15 mM）。 也应同步降低。 准确性的改进：降低dNTPs的浓度，但要注意Mg+2的摩尔浓度 也应同步降低。 中山大学药学院 Mg+2离子 Mg+2的标准使用范围：0.5 - 10 mM 特异性的改进：降低Mg+2浓度，但要注意过低的Mg+2浓度又会影 有效性的改进：提高Mg+2浓度，但过量Mg+2将导致非特异性扩增 游离的Mg+2离子浓度应高于dNTPs总浓度0.5-3.0mM。由于Mg+2 能与dNTPs形成可溶性的复合物，过低浓度的Mg+2离子将会影响 dNTPs的有效浓度。Mg+2的浓度影响扩增产物的特异性、引物退 火、引物二聚体的形成