从细胞到基因工程课件1.pptVIP

35S 标记外壳蛋白质,感染后放射标记不进入大肠杆菌细胞 32P 标记 DNA ,感染后放射标记进入大肠杆菌细胞 3、华生和克里克提出 DNA 双螺旋模型。 DNA 双螺旋模型说明 DNA 分子能 够充当遗传的物质基础。 按照双螺旋模型，在细胞分裂 时，DNA 的合成应是“半保留复制” 的模式。 DNA双螺旋模型 半 保 留 复 制 证实半保留复制的实验 细菌培养在含15N 的培养基 中 细菌培养在含14N 的培养基中 一代 两代 4、DNA作为遗传物质的功能 （1）贮藏遗传信息的功能 （2）传递遗传信息的功能 （3）表达遗传信息的功能 由此，克里克提出中心法则, 确 定遗传信息由 DNA 通过 RNA 流向 蛋白质的普遍规律。 DNA DNA 中 心 法 则 复制 逆转录 转录 RNA 翻译 蛋白质 遗传信息储存在核酸中 遗传信息由核酸流向蛋白质 5、基因理论中的许多复杂情况 以孟德尔学说为开端的遗传理论， 发展到以 DNA 分子结构为基础的分 子遗传学，使我们对遗传规律有了确 切的理解。 应该看到，实际上生命世界的遗 传现象远比上面谈到的要复杂得多。 一个基因一个性状？不一定。 例如肤色的控制至少有三个基因参 与。 基因决定性状，环境还起不起 作用？在基因型确定的基础上, 环 境常常会影响表型。 遗传和变异是遗传学的重要内容。 子代总是与亲代 相像， 而又有一些变化。 人的肤色至少由三个基因控制 产生黑色素的酶在较 高温度下失 活，所以毛色在端点位置呈黑色 环 境 影 响 表 型 三、基因工程技术和应用 1、基因工程技术 基因工程是生物技术的核心部分。 基因工程的操作可以简述如下： 基 因 工 程 的 操 作 流 程 将外源基因（又称目的基因，是一 段 DNA 片断）组合到载体 DNA 分子 中去，再把它转到受体细胞（亦称寄 主细胞）中去，使外源基因在寄主细 胞中增殖和表达，从而得到期望的由 这个外源基因所编码的蛋白质。 所以，基因工程的操作包含以下步骤： ? 获得目的基因 ? 构造重组 DNA 分子 ? 转化或转染 ? 表达 ? 蛋白质产物的分离纯化 到哪里去找目的基因？一般来 说，人的基因，要从人体的组织细胞 中去找；小鼠的基因要从小鼠的组织 细胞中去找。 从组织细胞中可以分离得到人/小 鼠的全套基因，称为基因文库。文库 中基因总数 就人来说约有 3 万个基因。 如何从中把需要的基因找出来？ 采取“钓”的办法。这个办法通常称为 印迹法。 （1）获得目的基因 印 迹 法 内切酶切开 DNA 电泳 胶片显影 印迹转移 放射性探针 杂交 印迹法的主要步骤： （1）基因文库－ DNA 用限制性内切 酶处理。 （2）DNA 片断混合物通过电泳分离。 （3）电泳后，通过印迹技术转到酯酰 纤维薄膜上，以便操作。 （4）用已知小片断DNA 作为探针， 互补结合需要找的基因片断。 （5）探针DNA 片断已用放射性元素 标记，使胶片感光后可看出。 印迹法的关键是“分子杂交”，利 用碱基配对的原则，用一段小的已知 的 DNA 片断去寻找（“钓”）大的未知 的基因片断。 探针 DNA 片断从何而来？ 根据目的蛋白的氨基酸序列，只 要其中 N－端 15－20 个氨基酸序 列，按三联密码转为 40-60 核苷酸序 列，人工合成，即为探针 DNA 片断。 （2）目的基因的扩增 用上面的方法“钓”出的目的基 因，数量极少，所以，接下来必须经 过扩增，亦称为基因克隆。获得相当 数量的目的基因后，才能继续下一步 操作。 克隆——生物分子， 细胞， 生物个体 的无性增殖过程都称为克隆。 （3）PCR —— 把寻找目的基因和 扩增目的基因两步操作并成一步。 PCR 法，又称多聚酶链式反应， 是近年来开发出来的基因工程新技 术，它的最大优点是把目的基因的寻 找和扩增，放在一个步骤里完成。 90 C 50 C 70 C P C R 操作流程 0 0 0 * 生命科学导论 上海交通大学生命科学技术学院 第五讲 从基因到基因工程 一、 孟德尔学说奠定了遗传学基础 二、 基因是一段DNA序列 三、 基因工程的操作和应用 生命最重要的本质之一是性状特 征自上代传至下代——遗传。 今天，从遗传学研究衍生出来的 基因工程技术，已构成生物技术的核 心，在实际应用中显示出极大的潜力。 一、孟德尔学说奠定了遗传学 基础 在孟德尔以前，人们看到遗传现 象，猜想遗传是有规律的，甚至在农 牧