§4-1微生物细胞数目讲述.ppt

第四单元 微生物生长测定技术 * * 模块一 微生物细胞数目的测定技术 微生物生长表现为微生物数量或质量的变化，通过此类指标测定可以了解微生物的生长状况， 计数法 生长量法 微生物生长的测定 （单细胞和多细胞微生物） （单细胞微生物） 一、显微镜直接计数法 可用于细菌、酵母等单细胞微生物，以及放线菌和霉菌的 孢子计数。 显微镜下的 直接计数法 （1） 血球计数板 （2） 细菌计数法 利用血球计数板或细菌计数板，在显微镜下对微生物数量进 行直接计数（计算一定容积的样品中微生物的数量）。 原理：将1cm2×0.1mm的薄层空间划分为400小格，从中均匀分布地选取80或100小格，计数其中的细胞数目，换算成单位体积中的细胞数。 优点：快速简便，还可以知道细胞的大小和形态特征 缺点：不进行特殊染色时，不能区分死菌与活菌，所计为总菌数； 采用特定的染色技术也可对活菌和死菌分别进行计数， 如利用美兰染液可进行酵母的活菌计数。 美兰染液 酵母细胞 区分死活细胞 二.平板菌落计数法——活菌计数法 原理：活菌计数法是通过在培养基形成的菌落来间接确定其活菌数的方法，也称平板计数法。原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。 活菌计数通常需要先将样品进行一系列稀释。方法的优点是能够测出样品中的活菌数，且灵敏度高。缺点是手续繁、时间长、影响因素多等。 三.最大可能数计数法 四.光电比浊计数法 比浊法：样品中由于菌体细胞呈浑浊，细胞数目越多，浑浊度越高，对光的通透性越小。浊度可以用比色计或分光光度计测量，以光吸收值来表示。单细胞生物在一定的范围内的光吸收值的大小与液体中细胞数目及细胞物质量成正比，因而可用做溶液中总细胞的计数。 该方法缺点是灵敏度差，优点是简便、快速、不干扰或不破坏样品。检测时可使用三角瓶在不同的培养时间重复测定样品的浊度，因而广泛地用作生长速率的测定。 五.薄膜计数法 常用该法测定量大、含菌量较少的空气和水中的微生物数目。 将定量的样品通过薄膜（硝化纤维素薄膜、醋酸纤维薄膜）过滤，菌体被阻留在滤膜上，取下滤膜进行培养，然后计算菌落数，可求出样品中所含菌数。 二、生物量的测定 1、重量法 （1）以干重/湿重 直接衡量微生物群体的生物量； （2）通过样品中含量稳定的细胞成分，如蛋白质/核酸含量的 测定，间接推算微生物群体的生物量； 测定多细胞及丝状的放线菌和真菌生长情况的有效方法 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来,然后烘干(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的10%—20%，而一个细菌细胞一般重约10-12—10-13g。 该法适合菌浓较高的样品。 举例：大肠杆菌一个细胞一般重约10–12~10–13g，液体培养物中细胞浓度达到2×109个/ml时，100ml培养物可得10~90mg干重的细胞。 干重法 将微生物培养液离心，收集细胞沉淀物，然后称重。 湿重法 *