操纵生命的时代(I).ppt

操縱生命的時代 (I) 基因工程和基因重組 科學與技術是密切關聯、不可分割的兩面，是當今社會發展最重要的推動力。技術的發明常常源自於科學的表現。 華生和克力克發現了 DNA雙螺旋結構，導致遺傳密碼的解開，一系列重大的科學發現使得應用 DNA的操作以生產有價值的產品成為可能，基因工程技術應運而生。 基因工程 基因工程（gene engineering）是指在微觀領域（分子階層）中，根據分子生物學和遺傳學原理，設計並實施一項把一個生物體中有用的目的 DNA（遺傳訊息）轉入另一個生物體中，使後者獲得新的遺傳性狀或表現所需的產物，而獲得該技術的商業價值。 例如： 利用轉殖基因的細菌、植物或動物生產某些含蛋白質成份的藥物、提高農作物抗病蟲害的能力、促進農作物的光合作用效率進而提高產量等等。 這種以重組 DNA操作為核心技術的過程，其目的、原理和步驟等類似於現代工程學科中的設計與施工過程，因此稱為基因工程。實施基因工程，就好比在微觀的細胞中設計並建構了一棟新的「建築」。 重組DNA技術是  基因工程的核心技術 重組DNA技術 又稱為基因複製（gene cloning），該技術包括了一系列的分子生物學操作步驟。就是把一個生物體對人類生活有用的基因，轉入另一個生物體中，使後者獲得新的遺傳性狀或表達所需要的產物。 重組DNA操作， 通常包括下列步驟： （1）獲得需要的目的基因（外源基因）。 （2）在限制內切酶，和連接酶作用下與載體連接，形成新的「重組 DNA」。 （3）用重組DNA分子轉化受體細胞，使之進入受體細胞並能夠在受體細胞中複製。 （4）對獲得外源基因的受體細胞進行篩選和鑑定。 （5）將獲得外源基因的細胞或生物體經過發酵、細胞培養、養殖或栽培等，獲得所需要的遺傳性狀或表現出所需的產物。 獲得所需之目的基因 獲得外源基因最常用的方法包括： （1）直接從生物體中提取總DNA，建構 基因文庫，從中調用目的基因。 （2）以mRNA為模版，反轉錄合成互補的 DNA片段。 （3）利用聚合酶連鎖反應（PCR）專一 地擴增所需目的基因片段。 提取總DNA建構基因文庫 在提取分離到的總 DNA中，目的基因片段含量很少，難以檢出和分離。因此，科學家用限制內切酶將總 DNA切開成為許多小的片段，把這些片段分別插入到環狀的 DNA載體即質體中，這些質體載體可以轉入細菌並隨著細菌的繁殖而複製，這種過程又稱為基因的單株複製。將總 DNA包含的基因組各片段分別複製在質體或噬菌體的載體上，便構成了該生物的基因文庫。 反轉錄人工合成互補DNA 建構基因文庫並獲取目的基因時，通常會費時費事，也會出現其他問題，如真核生物細胞的基因組都含有較多非編碼蛋白的中斷子序列，給建構基因文庫並獲取目的基因的過程，增添了難以克服的麻煩。為了避免這一問題，科學家發明了反轉錄人工合成互補DNA的方法。 聚合酶連鎖反應 1988年美國科學家 Mullis發明了聚合酶連鎖反應技術，即PCR技術。 PCR 技術就是在體外的小試管中藉由酶促反應選擇性地大量擴增和分離一段目的基因。該技術效能高、快捷、且專一性高。 完成 PCR 需要4種物質： （1）做為模版的DNA序列 （2）DNA引子 （3）DNA聚合酶 （4）4種去氧核苷酸 PCR 技術問世以來，已經在分子生物學、醫學、考古學、法學、人類學等許多領域中發揮了應用的價值。 建構重組質體 和基因單株複製 基因重組和複製操作最重要的工具是： 限制內切酶 載體 宿主菌 限制內切酶 是從細菌中分離提煉出來的核酸內側切斷酵素，可以辨別某一小段特殊的核酸序列並將其在特定位點處切開。由於它們可以在 DNA序列的特殊位點，將 DNA分割成特別需要的片段，所以被比喻為 DNA操作的分子手術刀。 Arber、Smith和 Nathans因為發現限制內切酶，對分子生物研究工作具有開創性的貢獻，而共同獲得了1978年的諾貝爾獎。目前為止，科學家已經鑑定出了200多種限制內切酶。 微量的目的基因必須經過基因單株複製獲得大量的複製品後，才能實現進一步的重組、轉化和表現等操作。 被限制內切酶切割開的 DNA並不能直接進入到細菌等宿主細胞中，切出的目的基因必須先嵌入到一個合適的載體中，才可能被轉入到宿主細胞中，並隨之繁殖而複製。 載 體 載體是運送目的基因片段進入宿主細胞的工具，目前最常用的載體包括： 細菌質體 λ噬菌體 cosmid質體 細菌質體是細菌細胞中自然存在於染色體外而可以自主複製的一段環狀 DNA分子。進入到宿主細胞中的一個質體，可以藉著細胞分裂大量增加其複製品。 基因技術並非僅僅在細胞體外將 DNA 分子與載體切開、再連接成重