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第六章 胚胎培养 制作人：郑春明 引言 植物胚胎培养是胚及胚器官（如子房、胚珠）在离体无菌条件下，使胚发育成幼苗的技术。包括幼胚培养、成熟胚培养、胚珠培养、子房培养、胚乳培养等。 胚胎培养已有近百年的历史，1904年的Haning最早成功地培养了萝卜和辣椒的胚，并萌发形成了小苗。30年代成功地把兰科植物的胚培养成小植株。40年代在苹果、桃、柑橘、梨、葡萄、山楂、马铃薯、甘蓝与大白菜的种间杂种的胚胎培养、胚乳培养及子房与胚珠培养均取得了不同程度的进展。 第一节 胚培养 一、培养类型 1.概念 采用人工方法把胚从种子、子房或胚珠中分离出来，再放在无菌条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 2.类型 胚的发育对营养的要求有两个阶段：①异养期与②自养期。根据胚发育对营养的要求不同，离体胚培养可分为两种类型：成熟胚培养与幼胚 (指子叶形成之前)培养。 第一节 胚培养 二、培养过程 幼胚培养过程 采集子房与消毒 剥离与接种 培养条件的控制：20~30℃，光照2000 lx，10~14h/d 观察与记录：幼胚培养过程中大致有以下三种情况： 胚性发育：即胚在何种上增大甚至超过正常胚大小而不能萌发成苗 早熟萌发：在幼脂还没迅速萌发成幼苗的现象。 产生愈伤组织：指在幼胚培养中放射性出愈伤组织，再由愈伤组织分化形成胚或不定芽。 成熟胚培养过程 种子消毒 种子吸胀 剥离与接种 25℃中暗培养 第一节 胚培养 三、培养基与培养条件 培养基 成熟胚是一个充分发育的两极结构，即含有根原基和茎原基以及一个或两个次生附属子叶。在培养时，成熟胚进一步发育，产生根和茎。这时期的胚在营养上是相对独立的，只需要提供简单的营养条件，在含有大量元素的无机盐和糖的培养基上即能生长。而未成熟的幼胚则完全是异养的，在离体情况下，要求更复杂的培养基。除了一般的无机盐成分外，还要加入微量元素和各种生长辅助物质。培养不同发育时期的幼胚对培养基成分的要求不同，胚龄越小，要求的培养基成分就越复杂。 用于培养成熟胚的培养基主要是Tukey, Randolph, White培养基。在培养基中以大量元素和微量元素的无机盐为基本成分，此外还加入一定浓度的糖类物质和多种生长辅助 用于培养幼胚的培养基主要有Cox, Rijven, White、Rangaswang, Norstog等幼胚培养基以及植物组织培养常用的ms,B5和Nitsch培养基。幼胚培养基中添加的蔗糖、维素和氨基酸在胚培养中起着较为重要的作用。培养不同发育时期的幼胚对培养基成分的要求不同，胚龄越小，要求的培养基成分就越复杂。 第一节 胚培养 三、培养基与培养条件 培养基 培养条件 糖类 糖类在培养基中主要作为有机碳源起营养的作用，并调节培养基的渗透势。糖类对于幼胚及脱离胚乳或与子叶分离后的成熟胚培养都是必需的。因为它们本身缺少贮藏物质，且不能进行光合作用。培养基中加人的糖类以蔗糖最为适宜，有时也可用葡萄糖或果糖。不同发育时期的胚要求的渗透势不同，对培养基中蔗糖浓度的要求也不同。处于发育早期的幼胚需要较高的蔗糖浓度，如果浓度过低，即引起胚胎过早萌发，高的蔗糖浓度可以抑制离体胚的早期萌发。随着胚的发育，则要求逐步降低蔗糖浓度。 第一节 胚培养 三、培养基与培养条件 培养基 培养条件 糖类 维生素 维生素对培养发育初的幼胚来说，一般认为是必需的。但是维生素在各种培养基的用量及组成上不是一成不变的，因为细胞能自身合成某些维生素。维生素及其衍生物对胚生长的促进作用不同，例如盐酸硫胺素对几种植物胚的培养表现出促进根的伸长，而生物素、泛酸钙和烟酸对茎生长的促进作用比对根更为显著。 氨基酸和酰胺类 在培养基中添加不同氨基酸，对胚的生长有着重要的影响。几种不同的氨基酸以适当配比加入，往往可获得较好的效果。 第一节 胚培养 三、培养基与培养条件 培养基 培养条件 糖类 维生素 氨基酸和酰胺类 植物生长物质 由于植物的种类及胚胎的发育时期不同，生长物质对胚胎发育的影响，有很大差异。关键问题应是设法使加入的生长物质之间与植物激素或其他生长因子之间保持某种平衡。 第一节 胚培养 三、培养基与培养条件 基本培养基 培养基的辅助成份 糖类 维生素 氨基酸和酰胺类 植物生长物质 天然有机物 成分极为复杂，对幼胚的生长都有不同程度的影响。例如，椰乳有促进幼胚生长和分化的作用，但经高温消毒后这种作用将会失效，只能通过过滤的方法进行消毒。从未成熟的（绿色）椰子中取出的椰乳经过滤消毒后加人培养基时，培养的胚生长最好。本种植物的胚乳或胚乳提取物应用于胚胎培养时，一般可以促进其幼胚的生长发育，但也有报道起抑制作用。 另外，活性炭吸收培养器官释放的有毒物质或培养基中