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细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 产品编号 产品名称 包装 P0027 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 50次 产品简介： ? 在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份，而研究得最多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。分离细胞核蛋白和细胞 浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究，例如 EMSA(也称gel shift) ，footprinting等。 ? 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养 细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方法。约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分 离。抽提得到的蛋白可以用于Western ，EMSA ，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。 ? 本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B ，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋 白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。 ? 本试剂盒可以抽提50个样品，如果每个样品的数量为约二百万细胞或约30-50毫克组织。 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 P0027-1 细胞浆蛋白抽提试剂A 10ml P0027-2 细胞浆蛋白抽提试剂B 0.5ml P0027-3 细胞核蛋白抽提试剂 2.5ml — 说明书 1份 保存条件： -20 ℃保存，一年有效。 注意事项： ? 需自备PMSF 。PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF(ST506) 可以向碧云天订购。 ? 抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4 ℃进行。 ? 本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果很差。可以抽提的组织样品数通常不足100个。 使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/ P0011/P00 12/P0012S)测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。 ? 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1. 准备溶液：室温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A备用，在使 用前数分钟内加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM。取适当量的细胞核蛋白抽提试剂备用，在使用前数分钟内加入 PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM。 2. 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下 细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目 的蛋白。 3. 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。 4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF 的细胞浆蛋白抽提试剂A 。(对于二百万Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为 20微升或40毫克。) 5. 最高速剧烈Vortex 5秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长vortex 时 间。) 6. 冰浴10-15分钟。 7. 加入细胞浆蛋白抽提试剂B 10微升。最高速剧烈Vortex 5秒，冰浴1分钟。 8. 最高速剧烈Vortex 5秒，4 ℃12,000-16,000g离心5分钟。 9. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。(千万不要触及沉淀，可 以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。) 10. 对于