VCAM-1CD106,猪血管内皮细胞粘附分子1试剂盒,ELISAkit.docVIP

VCAM-1/CD106,猪血管内皮细胞粘附分子1试剂盒,ELISAkit elisa试剂盒间接法简单操作步骤： （1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原； （2）加稀释的受检血清，保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗-体复合物； （3）加酶标抗抗体； （4）加入酶促反应底物，发生显色反应，显色的深浅与待测抗体的量成正比。 VCAM-1/CD106,猪血管内皮细胞粘附分子1试剂盒,ELISAkit 操作步骤?实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。?1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。?为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。?2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100ul（取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。?3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。?4. 每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100ul，37℃，60分钟。?5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。?6. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。?7. 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。?8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。?注：?1． 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。?2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。?3. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。?4. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。?洗板方法?手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。?自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。?特异性?VCAM-1/CD106,猪血管内皮细胞粘附分子1试剂盒,ELISAkit 本试剂盒可同时检测重组或天然的猪p-ERK，且与其它相关蛋白无交叉反应。?计算?以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。?注意事项?1． 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。?2． 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。?3． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。?4． 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。?5．在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。?6．底物请避光保存。 说明?1. 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。?2. 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。而且，洗涤不充分将影响试验结果。?3. 试剂盒保存：部分试剂保存于-20℃，部分试剂保存于2-8℃，具体以标签上的标示为准。?4. 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。?5. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实