开发描述单克隆的抗体特性对于共面的多氯化的联苯-何林芳翻译.doc

开发描述单克隆的抗体特性对于共面的多氯化的联苯 托马斯R·戴。玻璃，n，Hiroshi佐伯lsevier B V版权所有 1介绍 多氯联苯（PCBs）被广泛应用于工业上的应用，包括介电流体变压器，因为他们的理想的物理和化学成分，包括低水吸收，高热量和化学的稳定性, 他们的工业用途的锐减，然后停止在上世纪70年代为致癌和其他性能著称, 精确的性能使原本已经使他们对PCBs可取—特别是有害的环境毒素。由于其在脂肪组织中的蓄积, . 毒性大和在环境中的长期稳定性，检测技术为了多氯联苯继续产生大量的努力，关于209 PCB同系物，四非邻和八单邻，同系物的电流能力和很高的热稳定性和化学稳定性。他们最近由世界卫生组织认可的，作为“类”在他们的毒性作用。这12种已分配的毒性当量因子（TEF）的，他们相对的2,3,7,8 -四氯-p-二恶英，最有毒的二恶英[ 7 ]。一种PCB最高的TEF，同类0.1和分配给非邻科普拉NAR同类，3,3,4,45-六氯联苯l（126），一个印刷电路板，0.01第二高的TEF，被分配到3，4，5 -六氯联苯（PCB169）。同类的3,3,4,4四氯联苯（PCB77）是包含在12和过去[ 8 ]作为一个最有毒但最新的世卫组织毒性当量因子数[ 7 ]给它一个TEF 0.0001，这是在剩下的10个控制室温中。结合物通过PD-10 Col代纯化（毒性当量因子的范围从0.00001到0.0005）。这些和其他几个印刷电路板结构在表3中可以看到的。因为它们的高毒性相对于其他同类，T已经认识到，一个能够量化一个或所有这些同系物的检测将是非常可取的它也被广泛地认识到，这个目标很困难因为测量通常会发生在一些或所有其他206种未知的混合物的存在，往往在更高的浓度，有各种市售：测试工具提供的多氯联苯[3,9]。市售试剂盒用于筛选，通常是针对土壤，和目前的监管实践中指定的总PCB的限制，而不考虑同类内容。Chiu等人。4,8,10 ]和弗劳奈克等人。[ 11 ]都报道了酶联免疫吸附测定法（ELISA）为基础的免疫能识别PCB77和PCB126。虽然，他用一个单lonalantibody和弗劳奈克多克隆的混合，作者报告高特异性的PCB77和/或PCB126和PCB169可怜的识别。弗劳奈克报告的交叉反应性的3.3%，秋没有报道PCB169反应或甲醇。有趣的是，他发现有大约5%到20%的交叉反应性高的溶剂浓度，我们报告有三个新的单克隆抗体显示和三个非邻位共平面多氯联苯优良的亲和力和特异性特征的发展，PCB126 PCB169和PCB77的高亲和力和其中一个抗体，这三类二恶英多氯联苯的特异性从来没有被证明之前，和NGL -免疫分析基础的三点多氯联苯的灵敏度提供了。（455l）逐滴加入到搅拌BSA溶液在搅拌1min期间，继续在室温下过夜。结合物通过PD-10柱纯化（，CA，美国），用PBS洗脱液。该缀合物，pcb77-bsa，pcb126-bsa，pcb169-bsa，随后被用于免疫小鼠，免疫固相涂层。 2.2。用于单克隆抗体的生产程序PCB抗体 七周龄的小鼠注射25–50g perbody之一的PCB–BSA偶联物在辅助RIBI系统乳化（Corixa，西雅图，WA，USA）。每只小鼠6瓦sinjected–两weeksintervals三倍。在最后一天的助推器（50克/体）脾收获。骨髓瘤细胞（p3x63ag8.653；ATCC no.crl-1580）混合在1:5with聚乙二醇（PEG）脾细胞比例增加1500促进细胞融合。细胞培养在RPMI 1640培养基（GIBCO BRL，盖瑟斯堡，MD，USA）（10% FBS）+ P / sfor7–10天。因为，水溶性能做的（见下面的程序）50%（V / V）二甲基亚砜（nacalaitesque，京都，日本）选定的抗体。三株杂交瘤的选择 f纯（查尔斯河豚。实验室。，查尔斯河，加拿大）注射0.5ml 2,6,10,14-（进行测定）。10周后，杂交瘤细胞注射。后10–14天，收集小鼠腹水液，离心引入G蛋白IgG抗体的分离柱。 2.3。ELISA筛选杂交瘤抗PCB活性 杂交瘤上清液中的基础上，筛选三竞争分析各上清液。分离—说的是每个三目标多氯联苯进行。检测策略采用固定化抗体寻找生物素化的PCB和纯之间的竞争 PCB。根据本，96孔板（康宁，宁，纽约州，美国）首先被涂覆有Fc特异性抗小鼠1抗体。五十微升的10gml羊抗小鼠IgG抗体（FC）抗体（ICN生物医学，欧文，CA，USA）在PBS（137MM NaCl，KCl为3mm，na2hpo4,3mm磷酸二氢钾，pH 7.4）孵育，每个在37？1h。这种抗体的作用是作为一个特定的捕获的鼠抗PCB抗体试剂。好极了。0.005%（V / V）吐温