分子生物学第3章 核酸提取与鉴定课件.pptVIP

核酸的提取与鉴定 第一节 预处理 一、样品预处理 1、组织 组织有新鲜组织、甲醛固定或石蜡包埋组织。 新鲜组织先用生理盐水洗，然后将其捣碎或剪碎，加液氮研磨成粉状，加细胞裂解液裂解细胞； 甲醛固定组织要先去掉甲醛； 石蜡包埋组织要经过组织切片和二甲苯脱蜡等处理。 二、提取用具预处理 1、提取RNA所用器皿的处理及溶液的准备 塑料制品：使用灭菌的一次性用品。或用0.1％DEPC水浸泡或用氯仿冲洗(注意:有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀,故不能使用氯仿处理)。 玻璃用品： 使用前于180℃的高温下干烤6h以上，或在220℃下干烤3h以上。 有机玻璃的电泳槽等,可先用去污剂洗涤,双蒸水冲洗,乙醇干燥,再用3％H2O2室温浸泡10min，然后用0.1％DEPC水冲洗，晾干。 所需溶液的配制：必须用高压灭菌的水和RNA提取专用的化学试剂配制溶液，用干烤过的药匙称取试剂，把溶液装入无RNase的玻璃器皿。 严格来说，所有溶液均应用0.1％DEPC于37℃处理12小时以上，然后于100℃加热15分钟或高压灭菌15分钟，去除残余DEPC。 2．RNA提取中RNase污染的控制 在涉及RNA的一切操作过程中，都应戴一次性手套和口罩，应勤换手套。 一、DNA的常规提取 1、酚-氯仿提取法 2、浓盐法 核糖蛋白（RNP）与脱氧核糖蛋白（DNP）在不同浓度的NaCl