广东省东莞市麻涌中学高二生物人教版选修1专题2课题2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》学案.docVIP

班姓名 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、预习与质疑（课前完成） （一）预习内容 课本P21-26 （二）预习目标 1．阐述选择培养基的应用原理；能根据各种微生物的代谢特征，配制选择培养基； 2．阐述土壤中分解尿素的细菌的分离与计数过程，列举其中涉及的相关技术并会用这些技术解决生产生活中的相关问题。 一、．筛选菌株 (1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 2．当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。 3．设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。 二、实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下： ．取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先3 cm左右，再取样。 2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基 将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 3．微生物的与观察 将0g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液 ，转移至盛有 的无菌水大试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取 进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、个牛肉膏蛋白胨培养基。 将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。 挑选选择培养基中不2-lO的颜色反应。 4．细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。选择培养基的配制【例1】分析下面培养基的配方：KHPO4、NaHPO4、MgSO·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答： (1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别和 。 (2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有，又是如何进行选择的? 解析：碳源是提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。绝大多数生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以这种培养基对 启示：选择培养基筛选微生物的原理：人为提供有利于目的株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。统计菌落数目 【例2】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中得到以下几种统计结果，正确的是 ( ) A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和26，取平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是2l、240和250，取平均值233 解析：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板 A、B不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值 启示：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组；在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需重新实验。设置对照【例3】用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是 ( ) A．未B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 ．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D．接种了的选择培养基解析：将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照遵循的原则是单一变量，所以与选择培养基一样接种、培养。关于测定土壤中细菌数量叙述，正确是 ( ) A．一般选用103～107倍的稀液分别涂布 B．测定放线菌的数量，一般选用103、lO 4和105倍稀释 C．测定真菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释 D．当第一次测量某种细菌的数量，可以将101～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养关于微生物的培