广东省东莞市麻涌中学高二生物人教版选修1专题2课题3《分解纤维素的微生物的分离》学案.docVIP

班姓名 课题3 分解纤维素的微生物的分离 一、预习与质疑（课前完成） （一）预习内容 课本P27-30 （二）预习目标 1．能简述纤维素酶的种类及作用； 2．能从土壤中分离出分解纤维素的微生物；学会从土壤中分离某种特定微生物的原理和操作技术。 3．知道分解纤维素的微生物的应用价值。 （三）预习检测 一、纤维素与纤维素酶 1．纤维素的化学组成： 三种元素，是一种 糖。 2．纤维素的分布： 是自然界中纤维素含量最高的天然产物，此外，木材、作物秸秆等也富含纤维素。 3．纤维素酶的作用：纤维素酶是一种 ，一般认为它至少包括三种组分，即 酶、 酶 酶，前两种酶使纤维素分解成 ，第三种酶将纤维二糖分解成 。 二、纤维素分解菌的筛选 1．筛选方法： 染色法。 2．筛选原理：刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成 ，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以 为中心的透明圈，我们可以通过 来筛选纤维素分解菌。 三、试验设计 分离分解纤维素的微生物的实验流程图如下： → →梯度稀释 → → 1．土壤取样：采集土样时，应选择富含 的环境。 2．选择培养：阅读资料二“选择培养基”，回答以下三个问题： 【思考1】纤维素分解菌选择培养基属于 培养基，原因是什么？ 【思考2】该培养基选择作用机制是什么？ 【思考3】若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是什么？ （1）目的：增加纤维素分解菌的 ，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。 （2）)制备选择培养基：参照课本旁栏中的比例配制。 （3）选择培养：称取土样20g，在无菌条件下加入装有30mL培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在 上，在一定温度下振荡培养1～2d，直至培养液变 。也可重复选择培养。 （4）梯度稀释：依次将培养液稀释101～107倍。思考是如何操作的？ （5）将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 1制备培养基：参照课本旁栏中的比例。 2倒平板操作。 3涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1 mL涂布在平板培养基上，30℃倒置培养。 （6）刚果红染色法：挑选产生 的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 【思考4】本实验流程与尿素分解菌的分离实验流程有哪些异同？ 3．刚果红染色法：常用的刚果红染色法有两种【阅读资料三“刚果红染色法”，比较两种染色法的各自的优缺点】（见“疑难点拨疑难点拨 10．鉴别纤维素分解菌的培养基中碳源为（ ） ACMC-Na B．木聚糖 C纤维素 D裂解酶 下列物能分解纤维素的是（ ） ①人 ②兔 ③牛 ④蘑菇 ⑤纤维杆菌 A.①②③④⑤ B.②③⑤ C.②③④⑤ D.③⑤ 12．在加入刚果红的纤维素培养基中出现透明圈的菌落是（ ） A分解尿素的细菌 B硝化细菌 C乳酸菌 D分解纤维素的细菌 【疑难点拨】 12．将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？ 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌的生存的适宜环境。一般应将纸埋于深约10cm左右腐殖土壤中。 3．两种刚果红染色法的比较 刚果红在筛选纤维素分解菌上的应用已经有超过20年的历史，在本课题中我们给出了两种方法。方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂的问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明