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应用DHPLC技术进行诊断性分析的质量保证体系[65p]
应用DHPLC技术进行诊断性分析的质量保证体系 张泽云 美国环球基因公司中国代表处 诊断性分析的要求 临床分子遗传学分析的复杂性 临床分子检测结果的一致性和精确性 变性高效液相色谱(DHPLC)作为一种高效和敏感的基因突变检测技术 DHPLC技术质量控制 DHPLC SOPs Instrument or maintenance?SOP Technique General DHPLC SOP WAVE 3500, 3500 HT Method Disease-specific SOPs Rett, BRCA, HNPCCMarfan, … Application WAVE? System Operation and Maintenance Analysis of the WAVE? Low High Range Mutation Standards The maintenance procedure DNASep? and DNASep? HT cartridge maintenance Normal ranges of the mutation standards The maintenance procedure 3.1 Filter and flush 3.2 Pre-run maintenance 3.3 Weekly maintenance 3.4 Quarterly maintenance 3.5 Other maintenance operations 3.6 Preventative maintenance procedure and system validation Filter and flush The principle of filtration involves preventing unwanted contaminants from entering the system. Filtration applies to two specific areas: solvent filtration and in-line filtration. The system flushing is to remove mobile phase salt components that can precipitate under strong solvent conditions. Pre-run maintenance 1. Buffer check 2. Injection system washing 3. Pressure check 4. Check the absorbance on the detector 5. Purge the lines Weekly maintenance Inline filter replacement Check the syringe Quarterly maintenance Check UV lamp UV lamp replacement Cleaning the system (Isopropanol cleaning) DNASep? and DNASep? HT cartridge maintenance 1. Regular maintenance schedule Every 96-192 injections: Extended hot wash Every 1000 injections: Reverse hot wash DNASep? wash (if reverse hot wash fails to resolve mutation standards) 2. Short-term cartridge storage 3. Long-Term cartridge storage 4. New cartridge installation Daily Maintenance Equilibrate the cartridge 50%A 50%B for 15 minutes Run 1-2 blanks Verify system performance (pre-analysis) Run a standard Run Samples Verify system performance (post analysis) Weekly Maintenance An Extended Active Clean Wash is recommended every ~100 injections. (Usually done
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