分子生物学读阅延伸译文.docVIP

1.研究相互作用蛋白?质组学的意义？ 蛋?白质很少单独发挥其功?能，通常都是多种蛋白?质形成复合物起生物学?作用，全球范围内蛋白?质-蛋白质相互作用的?研究，也就是所谓的相?互作用组学已经成为非?常重要的现代分子生物?学。蛋白质是所有细胞?的重要组成部分，大多?数细胞行使功能时蛋白?质之间的相互作用是必?不可少的。如基因转录?，细胞周期调控，信号?转导或监控过程中等的?基本过程都依赖于正确?的功能蛋白质复合物。?“后基因组”时代的重?要里程碑之一是功能注?释的基因组数据的积累?。蛋白质形成时的干扰?或对组织内蛋白质复合?物的干扰，往往会导致?细胞功能障碍，最终导?致疾病。而且,在不同?的组织和细胞中,蛋白?质复合物的组成并非一?成不变,为适应细胞生?长的微环境变化,蛋白?质复合物的各组成成分?还存在着时间和空间的?表达差异性。因此,在?组织或细胞中众多蛋白?质协同发挥生理作用的?过程中,蛋白质复合物?的组成分析尤其重要，?这也进一步要求我们充?分揭示一个细胞或组织?中完整的蛋白质-蛋白?质相互作用网络—蛋白?质相互作用组。 2?.相互作用蛋白质组学?的研究方法有哪些? ? 答：⑴生物化学方法?：①免疫共沉淀法；②?亲和层析法。 ⑵ 遗?传学方法：①yeas?t two-hybr?id;②Protei?n-fragment? complemen?tation ass?ay(PCA);③M?embrane ye?ast two-hy?brid(MYTH)?;④Resonanc?e-energy t?ransfer (R?ET) system?s包括FRET、BR?ET、 BRET-F?RET(SRET)、?TR-FRET和FR?AP;⑤lumine?scence-bas?ed mammali?an interac?tome mappi?ng(LUMIER)?;⑥The mamm?alian prot?ein-protei?n interact?ion trap(M?APPIT) and? its varia?nts(Array ?MAPPIT、MAS?PIT和Revers?e MAPPIT);?⑦Phage dis?play;⑧Prot?ein microa?rrays 。 ①酵?母双杂交②蛋白质的片?段互补分析（PCA）?;③膜酵母双杂交（M?YTH）;④共振的能?量转移（RET）系统?包括FRET，BRE?T，BRET，荧光共?振能量转移（SRET?），TR-FRET和?FRAP;⑤基于发光?的哺乳动物相互作用组?的映射（LUMIER?）;⑥哺乳动物的蛋白?质 - 蛋白质相互作?用的陷阱（MAPPI?T）及其变种（的阵列?MAPPIT，MAS?PIT和反向MAPP?IT）;⑦噬菌体显示?屏;⑧蛋白质微阵列。? 3.与传统蛋白质相?互作用研究方法相比，?相互作用蛋白质组学的?优势在哪里？ 答：相?互作用蛋白组学技术可?以在生理条件下获得与?靶蛋白相互作用的蛋白?质，候选蛋白质与靶蛋?白的结合机会均等；灵?敏度高；鉴定出在空间?上非直接物理相互作用?的蛋白质，避免假阳性?出现；检测多亚基蛋白?质之间的相互作用；能?适用于大规模蛋白质相?互作用的研究等。传统?方法由于其粗糙性和经?济承受能力HTP互动?目前可用的数据仍然是?基于经典的Y2H。虽?然它最近已表明，Y2?H网络提供高品质的二?进制交互信息，但该方?法具有的固有的局限性?，如收缩相互作用的核?和使用酵母作为宿主系?统。而现在的方法是以?酵母系统为基础，应用?哺乳动物系统，因此提?供了一些优势，并且，?他们往往是技术上的挑?战，而不是扩展到HT?P格式。如的PCA，?RET为基础的方法或?MAPPIT操作方法?在哺乳动物细胞中，它?可以补充耦合质谱方法?（AP-MS）。这是?经常选用的方法，因此?HTP PPIs类药?物的研究被广泛使用的?亲和纯化。虽然AP-?MS需要相对严格的生?化隔离的蛋白质复合物?，但它可以适用于宽范?围的细胞类型。随着相?互作用蛋白质组学的成?熟可以有更多新颖的发?现，也可以使我们更好?的了解细胞内蛋白质之?间的相互作用。 1.?基因芯片在医学中有何?应用？ （1）发现新?基因（2）基因表达分?析（3）DNA序列测?定与序列间比较（4）?突变体和多态性的检测?（5）疾病的诊断。（?6）药物研究的重要技?术平台，大量应用与耐?药性检测、药物靶点寻?找、高通量的药物筛选?、药物作用机制和毒理?研究等。 2.基因芯?片的使用应注意哪些问?题？ ①根据研究课题?的需要来选取相关基因?芯片。 ②基因芯片的?数量：每实验组应最少?有5~6块基因芯片才?具有统计学意义。 ③?利用基因芯片时必须了?解在什么时间取材和取?什么组织进行检测的问?题。在什么时间取