铜锌SOD的分离纯化与活性鉴定.doc

铜锌SOD的分离纯化与活性鉴定 【实验导读】 蛋白质的提取分离技术是化学生物学研究者应该熟练掌握的重点技术之一。蛋白质的纯化步骤应根据纯化蛋白的具体性质来设计。可以利用到的性质包括蛋白质的分子量大小、蛋白质的等电点、对有机溶剂的耐受性、对温度的耐受性、中性无机盐对蛋白质溶解性的影响等等。为了保证蛋白质提取分离纯化的成功，需要在整个实验过程中，对所得蛋白质的总量和活性进行不断监测。SOD是超氧化物歧化酶的简称，是一个典型的酶类蛋白质。它催化超氧化物的歧化反应，是真核生物细胞内抗氧化酶系的重要组成部分。它能够耐受相对较高的温度、对有机溶剂丙酮和氯仿-乙醇也具有较好的耐受性。利用这些性质，本实验通过一些列实验流程达到了对大蒜SOD进行初步纯化的目的。每经过一个纯化步骤，本实验都将监测所得产物的总蛋白量以及总SOD活性，并计算SOD酶在总蛋白中的比活力（总SOD活性与总蛋白量之比）。如果分离纯化过程是成功的，则总蛋白量应不断下降，而SOD酶的比活力应不断上升。通过本实验的训练，读者应该能够初步掌握蛋白质的纯化流程，根据所给蛋白质的理化性质设计出一套比较合理的蛋白质纯化方案。 实验目的 1.进一步熟悉掌握分光光度计的使用方. 2.熟悉SOD提取与分离的基本原理与操作方法，学习一般蛋白质纯化的基本流程. 3.掌握考马斯亮蓝