复件12基因工程的基本操作程序课件.ppt

专题1 基因工程 （1）从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 PCR技术—聚合酶链式反应 原理： 前提： 条件： 基因表达载体的组成： ①目的基因： ②启动子： ③终止子： ④标记基因： 2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （2）程序： 1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 （1）农杆菌介绍： （2）原理及适用范围 三、将目的基因导入受体细胞 感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物无感染能力 3、将目的基因导入微生物细胞 （1）原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 （2）方法： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射受精卵 新性状动物 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 三、将目的基因导入受体细胞 思考： 根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理，你能分析出农杆菌不能将目的基因导入单子叶植物的原因吗？若想将一个抗病基因导入单子叶植物，如小麦，从理论上说，你应该如何做？ 单子叶植物通常不会合成酚类化合物，这是单子叶植物不易被农杆菌侵染的原因。 如果想将一个抗病毒基因转入小麦，也可以用农杆菌，但要注意两点：①要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌菌株都可以侵染单子叶植物；②要加趋化和诱导的物质，一般为乙酰丁香酮等，目的是使农杆菌向植物组织的受伤部位靠拢（趋化性）和激活农杆菌的Vir区（诱导）的基因，使T-DNA转移并插入到染色体DNA上。 * * 温故而知新 1、DNA重组技术的基本工具有哪些？ 2、限制酶的来源、作用、作用结果分别是什么？有何特点？ 3、DNA连接酶有几种？作用是什么？ 4、DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ 5、运载体的作用是什么？常用的运载体有哪些？ 6、运载体的条件有哪些？ 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 请举出三个以上的例子 2、获取目的基因的常用方法有哪些? （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 请阅读P9,了解：目的基因、基因文库的概念 ②基因 文库种类 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） ①.基因文库 基因文库的本质是 含有某生物基因的菌体群 ③基因文库的构建 （1）基因组文库的构建 提取某生物 全部DNA 用适当 限制酶切割 许 多 DNA片段 与载体连接 导入受体菌群 该生物基 因组文库 （每个受体菌含有一段不同的DNA片段） （2）cDNA文库的构建——mRNA反转录形成 与载体连接 导入受体菌群 mRNA 逆转录酶 杂交双链 核酸酶H 单链DNA DNA聚合酶 双链DNA (cDNA) 该生物 cDNA文库 建立基因文库是通过对受体菌的培养而储存基因 基因组文库与部分基因文库的关系 ④怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢? 根据基因的有关信息：如基因的核苷酸序列、基因在染色体上的位置、基因转录的mRNA，以及基因表达的产物等。 受体细胞 外源DNA扩增 产生特定性状 分离 目的基因 PCR扩增仪 DNA双链复制的基本原理 一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸(dNTP) 一对引物一对寡核苷酸序列：与目的基因的起始段互补 热稳定DNA聚合酶(Taq酶） DNA的两条链为模板 温度控制 （2）利用PCR技术扩增目的基因 5/ 3/ G—G T—C 3/ 5/ G—A C—C 5/ 3/ 引物Ⅱ G—G 变性 复性 延伸 1.目的基因DNA受热变性，解链； 2.引物与单链互补结合； 3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。 5/ 3/ A—G 引物Ⅰ （3）利用PCR技术扩增目的基因 过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，