专题78PCR技术的基本操作和应用.docx

专题78 PCR技术的基本操作和应用窗体顶端【基础回顾】 　　考点一、PCR原理 DNA热变性原理，即： 　　考点二、PCR反应过程 　(1)变性：当温度上升到90_℃以上时，双链DNA解聚为单链。 　(2)复性：温度下降到55_℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 　(3)延伸：温度上升到72 ℃左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 【技能方法】 1．细胞内DNA复制与PCR技术的比较 　　2．PCR的反应过程 　(1)变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链，如下图： 　　　(2)复性：温度下降到50 ℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图： 　　　(3)延伸：温度上升到72 ℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如下图： 　　3、PCR扩增易错点 　(1)DNA分子复制的人工控制 　　解开螺旋：在80～100 ℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。 　　恢复螺旋：在50 ℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。 　　复制条件：缓冲液、DNA模板、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶和两种引物。 　　反应场所：PCR仪。 　(2)PCR技术中的引物： 　①含义：引物是一小段单链DNA或RNA分子。 　②作用：为DNA聚合酶提供合成的3′端起点。 　③种类：扩增一个DNA分子需要2种引物。 　④数目：引物数目等于新合成的DNA子链数目。 　⑤与DNA母链的关系：两种引物分别与DNA母链的3′端通过碱基互补配对结合。 【基础达标】 1．PCR技术控制DNA的解聚与结合是利用DNA的（　　） 　A.特异性　　　B.稳定性 　C.热变性　　　D.多样性 【答案】C 【解析】 　　DNA分子在80～100 ℃的温度范围内变性,双链解开成单链,当温度慢慢降低时,又能重新结合形成双链。故选C。 2．引物的作用是（　　） 　A.打开DNA双链 　B.催化合成DNA子链 　C.使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始复制 　D.提供模板 【答案】C 【解析】 　　DNA分子的复制具有方向性，即只能从子链的5′→3′方向进行复制。当引物与DNA母链结合后，DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链。所谓3′、5′是指脱氧核糖上C原子的位置。选C。 3．下列关于PCR引物的说法,不正确的是（　　） 　A.引物是PCR过程中与模板DNA部分序列互补,并能引导模板DNA的互补链合成的核苷酸序列 　B.引物常根据需要扩增的目标DNA的碱基序列用化学合成的方法获得 　C.DNA聚合酶只能使DNA链从引物的3′端开始向引物的5′端延伸 　D.引物的3′端必须具有游离的—OH 【答案】C 【解析】 　　A项正确：所述是引物的特点和作用； 　　B项正确：引物是RNA或单链DNA片段，它能与母链的一段碱基互补配对，因此可根据扩增目标DNA的碱基序列用化学方法合成； 　　C项错误：DNA聚合酶使DNA链从引物的5′端向引物的3′端延伸； 　　D项正确：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′端末端的羟基上，形成磷酸二酯键。 4．下列操作过程的叙述中错误的是（　　） 　A.PCR反应中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压蒸汽灭菌 　B.PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份,并在-20℃储存 　C.PCR所用的缓冲液和酶从冰箱拿出之后,迅速融化 　D.在微量离心管中添加反应成分时,每吸取一种试剂后,移液器上的吸液枪头都必须更换 【答案】C 【解析】 　　A项正确：为了防止外源DNA等因素的污染,PCR反应中所用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水等,在使用前要进行高压蒸汽灭菌； 　　B项正确：PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份,并在-20 ℃储存； 　　C项错误：在使用前,将PCR所需试剂从冰箱内拿出来,放在冰块上缓慢融化； 　　D项正确：使用一次性吸液枪头。 5．PCR技术扩增DNA，需要的条件是（　　） 　①目的基因　　　　②引物 　③四种脱氧核苷酸　④DNA聚合酶等 　⑤mRNA　　　　　　⑥核糖体 　A.②③④⑤　　　B.①②③⑥ 　C.①②③④　　　D.①③④⑤ 【答案】C 【解析】 　　PCR技术需要目的基因作为扩增的模板，DNA聚合酶催化反应的进行，而引物是满足DNA聚合酶起作用的需要，四种脱氧核苷酸是该过程的原料。故选C。 【能力提升】 1．多聚酶链式反应(PCR技术)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增，其简要过程如