液相色谱-故障和维护讲课.ppt

重复性差、回收率低 实验的重复性差 色谱柱被污染 流动相pH值及组成不合适造成键合相流失 样品溶剂不同或样品本身不稳定 回收率低，不出峰 “不可逆”吸附 固定相过强或流动相过弱 非特异性吸附 色谱柱以外的因素（一） “柱效”问题，不一定是色谱柱问题！ 仪器问题：连接不好造成死体积 进样器 检测器 管路，连接口 保护柱 在线过滤器堵塞 流动相问题：色谱柱未平衡好 进样量太大 色谱柱与仪器的联接 除HP外，不同公司产品，其接头不同。处理不当时，会造成： 色谱峰展宽（死体积）使柱效下降、或渗漏 解决办法： 自制相应的转换接头 使用“通用”型接头（锥箍及螺母） 这种锥箍在不锈钢管上是活动的，因此可以换接不同的色谱系统及色谱柱。从Phase Separations公司能得到一些PEEK工程塑料的接头，可用在所有类型的色谱柱上的。 Waters色谱柱的联接 Waters及Phase Separations锥箍及螺母相同，但锥箍前露出不锈钢管长度不同，其长度被称为：“stop-depth” Waters除Spherisorb以外的各种品牌的色谱柱用的是“Waters”标准，其stop-depth的长度为0.130英寸 Spherisorb品牌的色谱柱及Phase Separations公司其他品牌色谱柱用的是“Parker-style”标准，其 stop-depth 为0.090英寸 HPLC常用的色谱柱接头 Troubleshooting LC Fittings, Part II. J. W. Dolan and P. Upchurch. LC/GC Magazine 6:788 (1988) 0.09 in. = 2.33 mm Swagelok 安捷伦1100液相 Parker Valco Uptight 0.09 in. = 2.33 mm 0.08 in. = 2.07 mm 0.09 in. = 2.33 mm 0.13 in. = 3.37mm 0.17 in. = 4.40mm Waters Rheodyne 不同的Stop-Depth长度 0.12mm内径管线用于毛细管HPLC中2.1内径色谱柱 0.17mm内径管线用于分析型HPLC中2.1~4.6内径色谱柱 0.25mm内径管线用于半制备型HPLC中9.4内径色谱柱 0. 5mm内径管线用于制备型HPLC中21.2内径色谱柱 连接管线与接头 色谱柱: StableBond SB-C18, 4.6 x 30 mm, 3.5 mm 流动相: 85% H2O with 0.1% 三氟乙酸 : 15% ACN 流速: 1.0 mL/min 温度: 35°C 50 mL 柱外体积（管线） 4 3 2 1 Time (min) 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 10 mL 柱外体积 Time (min) 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 4 3 2 1 样品: 1. 苯丙胺酸 2. 5-苯基-3, 6-二氧-2-哌嗪乙酸 3. Asp-Phe 4. 天冬甜素 如果伸出的管线长度过长，可能漏液 螺母坡度不匹配，密封性差 死体积区 如果伸出的管线长度不够，可能产生死体积 HPLC常用的色谱柱接头 零死体积连接 色谱柱以外的因素（二） 柱压过高问题，不一定是色谱柱问题！ 系统反压问题 阻尼器堵塞 进样器堵塞 管路或连接口堵塞 在线过滤器不干净 保护柱 压力传感器不准确 流速是否错误? 色谱柱以外的因素（三） 实验的重复性差 梯度实验时平衡时间不足 温度波动 流动相组成改变 样品溶剂不同 样品稳定性不好 方法的开发不好 缓冲液的pH值不合适 缓冲液的缓冲能力不足 简单的判别方法 高的柱反压是否伴随着 保留时间变化? 峰形变坏? 分辨率变坏? 测量色谱系统的谱带展宽 典型的分析系统应远小于 100 微升 如大于此数应检查仪器系统 * This slide provides an overview of the manufacturing process along with a schematic view of the surface chemistry. Even when the surface is bonded there are still silanol groups present which can influence chromatographic selectivity and peak shape. * To continue with t