香椿叶中槲皮素的提取分离鉴定范例.ppt

“ ” “ ” 香椿叶中槲皮素的提取分离与鉴定 13应用化学 刘子发 香椿的营养价值 香椿的营养价值较高，除了含有蛋白质、脂肪、碳水化合物外，还有丰富的维生素、胡萝卜素、铁、磷、钙等多种营养成分。 祖国医学认为，香椿味苦、性平、无毒，有开胃爽神、祛风除湿、止血利气、消火解毒的功效，故民间有“常食香椿芽不染病”的说法。 现代医学及临床经验也表明，香椿能保肝、利肺、健脾、补血、舒筋。如香椿煎剂对肺炎球菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌等有抑制作用；用鲜椿芽、蒜瓣、盐捣烂外敷，对治疮痛肿毒有较好疗效；民间用香椿煮水服用，治疗高烧头晕等病。 槲皮素的结构与物化性质 槲皮素是一种多羟基黄酮类化合物，化学名为3，3’4’，5，7- 五羟基黄酮，具有多种生物学活性及很高的药用价值。槲皮素广泛存在于植物的花、叶、果实中，已知有 100 多种中草药中含有槲皮素，如槐米、槐花、丹皮、香椿叶、菊花、田基黄、车前子等。 槲皮素，又名栎精，槲皮黄素，溶于冰醋酸，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。二水合物为黄色针状结晶（稀乙醇），在95-97°C成为无水物，熔点314°C（分解）。能溶于冷乙醇（1:290），易溶于热乙醇（1:23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等，不溶于水、苯、乙醚、氯仿、石油醚等，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。黄色针状结晶, 槲皮素属黄酮类化合物，多以甙的形式存在，经酸水解可得到槲皮素。可作为药品，具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。 槲皮素的药理作用 抗氧化及清除自由基的作用。电离辐射作用于机体会产生大量自由基 , 引起包括脂质过氧化在内的一系列自由基反应。 过剩的自由基是有害的 ,能够导致细胞结构的改变和功能的破坏 ,甚至引起癌症、 衰老及心血管等许多疾病。 实验证明 ,黄酮类化合物对超氧阴离子 ( O2-)、羟自由基(· OH) 和单线态氧 (1O 2 ) 均有良好的清除作用。 抗癌作用。槲皮素对人卵巢癌、乳腺癌、白血病细胞、胃肠道肿瘤细胞均有增殖抑制作用。槲皮素对人卵巢癌细胞增殖有明显抑制作用 , 且具有可逆的时间、剂量依赖性。 抗凝血作用。 人血小板细胞骨架主要由 F-肌动蛋白、肌动蛋白结合蛋白和 α-辅肌蛋白组成 , 它们组成的微丝在血小板的变形、 颗粒释放、伸展和收缩中起着重要作用。 保护心血管。槲皮素通过抑制内皮素 的释放 ，降低血管的紧张性，从而扩张血管达到降低血压的作用。 天然产物常用基本提取方法 煎煮法,是将经过处理的药材,加入适量水加热煮沸次,使其有效成分煎出,这也是一种简便、常用的方法。 浸渍法,是最常见的简便浸出方法。 渗渡法,是用流动的溶剂渗过药粉而进行提取。 升华法。 近年来,一些新的提取分离技术己开始引入中药有效成分提取的研究中。这些新方法、新技术包括超声提取法、超临界流体提取法、微波辅助提取法、半仿生提取法、酶法、反胶团溶剂提取法、双水相提取技术、空气爆破法、破碎提取法和液泛法等。许多研究结果表明,与传统方法相比,这些技术有产率高、纯度高、速度快、物耗能耗少等特点,有着广阔的研究和应用前景。本节将对超声提取法和超高压提取法进行较深入的介绍。 萃取 香椿粉末500g 80%乙醇 回流3h 滤液 滤渣(重复一次) 水,石油醚 氯仿 母液 水 加热1.5h,乙酸乙酯萃取 25%HCl 萃余液 乙酸乙酯溶液 聚酰胺色谱分离 乙酸乙酯溶液 水洗至中性 蒸干 样品 适量乙醇 溶液 聚酰胺(140~160目)柱 依次水,20%,50%, 70% ,90%, 乙醇梯度洗脱,浓缩 浓缩液 聚酰胺(140~160目)柱 常压层析,70 %,90% 乙醇 梯度洗脱,浓缩 浓缩液 聚酰胺(140~160目） 苯:甲醇(1:1) 黄色流分 黄绿色粉末 浓缩 鉴 定 熔点315～317℃ ，(分解)紫外灯下显兰色荧光，加AlCl3乙醇溶液萤光变黄绿色，盐酸一镁粉反应显红色，a-萘粉浓硫酸反应不显紫色。 锆一枸橼酸反应：当加2%氯化锆甲醇液时显黄色，再加2 %橼酸甲醇液用水稀释黄色不褪。 紫外光谱UV：λmax，nm，255，301sh 370(MeOH)；241sh，331，412(NaOMe)；271，342sh，446(AlCl3)；266，302sh，359，427(AlCl3／HCl)；258sh，270，324，382(NaCAC)；260，386(NaCAC／H3BO3)，与槲皮素标准品的紫外光谱一致。 红外光谱IR νmax cm-1 3459—3284(OH)，1670(c= 0) HPTLC(高效薄层层折)：展开剂为苯：乙酸乙酯：甲酸(40：10：5)，PA—TLC(聚酰胺薄膜层析)：展开剂为苯：甲醇(1：1)，所得斑点的Rf值与显色萤光皆与槲皮素