水中总菌落数检测方法－滤膜法(NIEAE205.57B).doc

水中總菌落數檢測方法－濾膜法1020030379號公告 中華民國102年5月8日環署檢字第1020037762號函勘誤 自中華民國102年6月15日生效 NIEA E205.57B 一、方法概要 本方法係使用濾膜過濾水樣，於 35 ± 1℃ 以 m-HPC 培養基培養48 3 小時後，計數水中好氧及兼性厭氧異營菌。 二、適用範圍 本方法適用於飲用水地面水體、地下水體、廢水、污水 三、干擾 （一） 水樣中含有抑制或促進細菌生長的物質。 （二） 檢測使用的玻璃器皿及設備含有抑制或促進細菌生長物質。 （三） 濁度過高之水樣易造成濾膜孔隙阻塞，或造成細菌菌落瀰漫生長（Spreading）而影響水樣檢驗的觀察及結果的判讀。 四、設備 （一） 量筒：100 至 1000 mL 之量筒。 0.1 mL 刻度之 10 mL玻璃吸管或無菌塑膠吸管，或無菌微量吸管icropipet)。 100 至 1000 mL 能耐高溫高壓滅菌之硼矽玻璃製品。 1000 mL 能耐高溫高壓滅菌之硼矽玻璃製品。 60 × 15、50 × 12 mm 或其他適當大小。 120 mL 以上之硼矽玻璃或塑膠有蓋容器，或市售無菌袋。 （八） 冰箱：溫度能保持在 4 ( 2℃。 （九） 水浴槽：溫度能保持在約 50℃。 （十） 抽氣幫浦：壓力差宜為 138 至 207 kPa。 47 mm、孔徑 0.45 μm 且有格線的無菌濾膜。 （十三）培養箱：溫度能保持在 35 ± 1℃。 （十四）高壓滅菌釜：溫度能保持在 121℃（壓力約 15 lb/in2 kg/cm2）滅菌 15 分鐘以上。 （十五）高溫乾熱烘箱：如用於玻璃器皿等用具之滅菌，溫度須能保持在170 ± 10℃ 達小時以上。 五、試劑 本方法所使用的化學藥品須為試藥級以上，培養基為微生物級製品。 （一） 試劑水：導電度在 25℃ 時小於 2 μmho/cm（μS/cm）。 （二） 培養基m-HPC 瓊脂培養基（或稱 m-SPC 瓊脂培養基），依下列配方配製培養基，或使用市售商品化的培養基均可。 Peptone） 20.0 g 明膠（Gelatin） 25.0 g 甘油（Glycerol） 10.0 mL 瓊脂（Agar）15.0 g 試劑水 1 L 將甘油以外之成份混合，以 1 N 之氫氧化鈉溶液調pH 值至 7.1，加熱溶解後加入甘油，121℃滅菌 5 分鐘。待冷卻至約 50℃至無菌培養皿中室溫下靜置凝固保存於，保存。可根據檢需求量，依配方比例配製培養基。 1. 磷酸二氫鉀儲備溶液 取 3.4 g 磷酸二氫鉀（KH2PO4）溶於 50 mL 之試劑水中，俟完全溶解後，以 1 N 之氫氧化鈉溶液調整其 pH 值為 7.2 ± 。然後加水至全量為 100 mL，儲存於冰箱中備用。可根據檢需求量，依比例配製 2. 氯化鎂儲備溶液 取 8.1 g 六水氯化鎂（MgCl2·6H2O），先溶於少量水中，俟完全溶解後，再加水至全量為 100 mL，儲存於冰箱中備用。保存期限為個月。可根據檢需求量，依比例配製. 無菌稀釋液 分別取 10 mL 氯化鎂溶液和 2.5 mL 磷酸二氫鉀溶液加入水至全量為 2000 mL，混搖均勻後，分裝於稀釋瓶中，經 121℃滅菌15可根據檢需求量，依比例配製 六、採樣與保存 （一） 採微生物檢測之水樣時，應使用清潔並經滅菌之玻璃瓶、無菌塑膠容器或市售無菌採樣袋，且於採樣時應避免受到污染。水樣若含有餘氯時，應使用內含硫代硫酸鈉錠劑之無菌採樣袋，或於無菌容器中加入適量之硫代硫酸鈉）。 70% 至 75% 酒精消毒。所採水樣應具有代表性。 。 24 小時內完成，並置入培養箱中培養。 100 mL。 （一） 水樣在進行檢測或稀釋之前必須劇烈搖晃 25 次以上，以使樣品充分混搖均勻。 （二） 視水樣中微生物可能濃度範圍進行水樣稀釋步驟。使用無菌吸管吸取 10 mL 之水樣至 90 mL 之無菌稀釋液中，形成 10 10 倍稀釋度水樣以相同操作方式進行一系列適當之 100、1000、10000 （四） 以無菌吸管吸取 10 mL 的原及（或）各稀釋度水樣至無菌過濾器中過濾 35 ± 1℃ 下培養 48 ± 3 （八） 計數各稀釋度培養皿中所產生的菌落數並記錄之。若菌落太多造成計數困難時，則以「菌落太多無法計數」（Too numerous to count；TNTC）表示。最接近個菌落數之同一稀釋度的兩個培養皿 （九） 步驟（二）至（）須在無菌操作內操作。 註： D：選取培養皿之稀釋度 X、Y：D稀釋度的兩個培養皿之菌落數 （二） 若結果與八、（一）所述不符，則以下列方式計算總菌落數： 1. 若原液及各稀釋水樣中，僅有一個稀釋度的一個培養皿之菌落數在 20 至