2016-2017届高中生物第4章生物化学与分子生物学技术实践第2节分子生物学技术学案苏教版选修1.docVIP

第二节　分子生物学技术 1．简述PCR技术的原理及基本操作步骤。(重难点) 2．尝试进行DNA片断的PCR扩增。(难点) P C R 扩 增 的 原 理 和 过 程 1．细胞内DNA复制的条件 原料 4种脱氧核苷酸 模板 2条DNA母链 酶 解旋酶和DNA聚合酶 引物 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 2.PCR扩增技术 (1)概念：在体外快速扩增特定基因或DNA序列(目的DNA片段)的实验技术，又称为体外基因扩增技术或DNA扩增技术。 (2)PCR技术的原理： ①条件：DNA模板、TaqDNA聚合酶、脱氧核苷酸引物、四种脱氧核苷酸。 ②PCR扩增的特点：快速、简便和灵敏。 ③进行PCR的先决条件：待扩增的DNA片段3′端的脱氧核苷酸序列要为已知。 ④引物序列确定的依据是：被扩增区域的3′端边界DNA序列。 3．PCR反应的过程 变性— ↓ 退火(复性)— ↓ 延伸— [合作探讨] 探讨1：什么是引物？DNA复制时为什么需要引物？ 提示：所谓引物是指两段与待扩增的DNA序列互补的一小段DNA或RNA片段。在DNA扩增时，DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3′端延伸DNA链，因此克隆DNA时应加入两种引物。 探讨2：为什么PCR需要耐高温的TaqDNA聚合酶？ 提示：因为PCR反应过程中变性和延伸都需要较高的温度，一般的DNA聚合