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L．色氨酸生物合成的途径分析 王健陈 宁张克旭 (天津科技大学食品科学与生物工程学院天津300222) 摘要应用途径分析的方法对谷氨酸棒杆茵在稳态时由葡萄糖生物合成【广色氨酸的途 径进行了分析，确定了。色氨酸生物合成的最佳途径及其代谢流分布和最大理论产率。 关键词I广色氨酸，途径分析 【广色氨酸是人体和动物生命活动中八种必需氨基酸之一，对人和动物的生 长、发育和新陈代谢起着重要的作用。近年来，随着色氨酸在医药、食品和饲料 等方面应用的开拓，市场需求量不断增加，目前，全世界年需求量在一万吨以上， 而实际产量仅有一千吨左右，远远不能满足市场需求。提高色氨酸发酵产率、降 低生产成本已成为目前一个重要课题。近年来，人们利用代谢工程方法改变细 胞内部的代谢流分布，使其在一定环境下生成更多的产物。代谢流分析 (Metabolic analysis)等方法是代谢工程中用 nu】(Analysis，MFA)、途径分析(Pathway 以指导遗传操作的理论基础，是代谢网络分析的基本方法。代谢网络分析已从 简单的分析代谢反应挂图发展到深入研究代谢网络结构LlJ。途径分析中的凸分 析在代谢工程中广泛应用，一些线性程序的方法可用于计算最优产率等问 题。[2-4]本文应用该方法分析了谷氨酸棒杆菌由葡萄糖生产L广色氨酸的途径，确 定了L广色氨酸合成的最佳途径及其代谢流分布和最大理论产率，以此结果为指 导，通过发酵过程优化，使目的产物L＼I色氨酸的代谢流明显提高。 1理论基础 一个反应网络的动力学可用公式dX／dt=SV表示。式中X是细胞内代谢物 浓度向量，s是化学计量学矩阵，V是通过反应的代谢流。在细胞内，一些反应是 不可逆的，为方便定义每个反应都是单向的，将可逆反应定义为两个独立的反 应。这样在稳态时，反应网络必须满足SV=O(V≥0)。由此，若以向量ei来代表 一个基本反应模型，则所有可能代谢流的向量Y可定义为这些模型的非线性组 · 109· 析角度看，反应的不可逆使网络中的代谢流处于一个凸圆锥中，该圆锥可由一些 矩阵方法计算出的向量确定。这些向量在代谢系统环境中被看作极端途径，每 一个射线向量对应着一个特殊的途径和约束系统的不等式。代谢网络中的一个 反应模型就是一个不能由其它基本模型的非负线性组合产生的反应序列。因 此，这些反应模型中就有一个代表了最高的产率和代谢流的分布。 理想载流途径的改变开始于酶的确定、理论产率的计算和确定最优的代谢 流分布。 2色氨酸生物合成途径分析 谷氨酸棒杆菌由葡萄糖生产色氨酸的 途径如图1所示。本文基于以下原则建立 代谢网络：(1)由于菌体生长过程中代谢网 络复杂，同时我们主要考察葡萄糖到色氨 酸的完全转化，因此本文中将不考虑细胞 生长代谢。(2)在色氨酸合成过程中ATP 产生的过程非常复杂，所以在分析过程中 并未考虑能量平衡。(3)按照固定比例进 行的反应以及无分支点的中间反应，可简 化为一个反应过程。(4)由于不同的酶可 以催化同一个反应，重复反应被去除。为 了简化化学计量学矩阵，将从葡萄糖到色 氨酸途径的多数反应看作不可逆的 T印 图1色氨酸生物合成代谢网络 (趾u5pX)d5P、PI妒+c02斗叫执、Fru6P+ Metabolicnetworkfor Fig．1 mapL-Trpsynthesis GApXyl5P+FAP除外)，包含可逆反应会 产生模型的无效循环，所以在途径组合过程中不允许选取可逆反应的两个方向 进行组合。由葡萄糖生成L广色氨酸的化学计量学矩阵见表1，根据表1数据，由 计算机可计算出该代谢可分为25个模型(见表2)。反应模型中的每个元素代表 相应反应的相对代谢流。基本模型中的“O”代表不必要的反应或可以被敲除的 基因。每种模型色氨酸的产率可由模型中色氨酸与