土壤中尿素的细菌的分离与统计概要.pptx

课题2 土壤分解尿素的细菌的分离与计数 一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因: 它们能合成脲酶 课题目的: ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 一、研究思路 (一)筛选菌种 1 实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 启示： PCR技术：要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 寻找目的菌种时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 耐高温的酶 耐高温生物体 耐高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 Taq细菌 筛选原因:因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物,只有Taq细菌生存下来即被筛选出来。 2、 实验室中微生物的筛选 ①原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 ②方法： 利用选择培养基分离 微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 目的菌株： 其他微生物： 促进生长 抑制或阻止生长 本课题使用的培养基配方 ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源： 葡萄糖、尿素 氮源： 尿素 ③该培养基对微生物是否具有选择作用？ 该培养基的氮源为尿素（唯一），只有能合成脲酶的细菌才能分解尿素。以尿素为唯一氮源，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而无法生长，所以能够选择出能分解尿素的微生物。 怎样证明此培养基具有选择性呢？ 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基 ?是 分离 尿素 细菌 判断该 培养基 有无选 择性 只生长尿素细菌 生长多种微生物 是 ㈡.统计菌落数目： 1、常用方法： 稀释涂布平板法 ①原理： 在样品的稀释度足够高时，在固体培养基上所形成的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测样品中大约含有多少活菌。 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C： 某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V： 涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)； M： 稀释倍数。 ②计算公式： 稀释涂布平板 → 统计菌落数 1个菌落 → 1个活菌 例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 甲：第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组， （至少涂布3个平板），因此结果不具有说服力。 乙：第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 第一位同学：没有重复实验（至少涂布3个平板） 第二位同学：A组结果误差过大，不应用于计算平均值 说明设置重复组的重要性。这个实例的启示：在设计实验时，同一稀释度，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。 〖思考〗 A同学的结果与其他同学不同，可能的解释： （1）土样不同 （2）由于培养基污染或操作失误。(或者是混入了其他的含氮物质) 请通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素。 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 ㈢设置对照： 对照实验是指除了被测试条件以外，其他条件都相同的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试和条件引起相应的结果。 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 判断培养基中是否有杂菌污染： 将未接种的培养基同时进行培养。 判断选择培养基是否具