显微摄影-仪器信息网.doc

显微摄影　　 显微摄影是通过显微镜进行拍照的一种技术方法。　　 显微镜是一种观察微观事物的重要光学仪器。利用它的高倍放大作用可以观察到肉眼直接看 不到的信息。显微摄影又可以把显微镜观察到的现象记录下来，供人们更广泛的研究。　　 显微镜分为光学显微镜和非光学显微镜两类。（非光学显微镜有电子显微镜、超声波显微镜 等）　　 下面我们将对显微镜的一般构造、基本成像原理和显微摄影的方法做一个简单的介绍。　　 一、光学显微镜的构造、成像和性能　　 近代光学显微镜，基于不同用途、种类繁多，如有生物显微镜、金相显微镜，解剖显微镜 等，但基本结构仍为光学和机械两个部分。　　 单式光学显微镜（通常用的放大镜、解剖镜等）光学结构简单、放大倍数小、光行差明显， 不宜进行显微摄影，在这里就不作介绍了。　　 复式显微镜光学系统比较完善、机械装置比较复杂，适合于显微工作的开展（见图8-55） 。 图8-55 　　1.显微镜的成像　　 显微镜的成象光路（见图8-56）。 图8-56 　它通过目镜、物镜等光学器件构成放大光路，而使所得虚像A“B”的距离恰好等于人眼的 明视距离——250毫米，以获得将标本放大10～200倍的可见影像。　　 2.光学显微镜的基本结构　　 光学显微镜的基本构造分为两部分。一部分是光学系统，如接目镜、接物镜、聚光器、光源 等，另一部分是机械系统，如镜脚、镜臂、镜筒、载物台、物镜转换器、大小螺旋、推进 器等。　　 其中：　　 接目镜高倍15～20接倍10 低倍5 接物镜干燥系低倍2～20 接物镜中倍40 水漫系高倍60 甘油浸系 油浸系90～120 聚光器集光镜 虹彩镜台下装置 反光镜　　（1）接物镜　　 接物镜是光学显微镜的关键部件，整个显微镜系统的成像质量与分辨率都由接物镜决定。它 由一组精密的透镜组成，其作用是将检视标本做第一次放大。显微接物镜生产时做过各种像 差校正，它有一个光阑——孔径光阑，可以控制入射光束的直径，其作用是减小或扩大视场 而不改变像的明亮度。　　 接物镜有不同倍率其中干燥系用在正常情况下观察。水浸系或油浸系在观察时要 在接物镜口与标本结合处点水或点油。　　 由于接物镜的成像质量影响摄影效果和观察效果，所以接物镜也是显微摄影的重要组成部分 。　　 接物镜有三个主要参数——数值孔径N·A值、放大率和盖片厚度。它们都标在镜头 壳上。　　 N·A值　　 数值孔径N·A是标志物镜工作性能的重要参数，它决定了物镜的分辨率。N·A=n·sinθ (如下图解8-57) 式中n为介质折射系数，Q为入射角。 图8-57 　　图8-57中，表明了物镜数值孔径与介质折射系数、入射角的关系。理论上的最大入射角为1 80°， 它的一半（90°）的正弦等于1，而空气的折射系数为1.0，水的折射系数为1.33，松节油的 折射系数为1.5，所以在同样入射角情况下液浸物镜数值孔径比干燥物镜的大，因此分辨能 力也大得多。　　 N·A值越大，分辨率越大，N·A值越小，景深与焦深越长。　　 N·A值尚与镜口角有关，镜口角越大，进光量越大，所视像野中的影像越清楚，分辨率就越 大。反之，分辨率就小以致看不清楚。由于低倍物镜的镜口角小于高倍物镜的镜口角， 所以低倍物镜的分辨率就不如高倍物镜的分辨率大。（这是指干燥系而言，油浸系物镜有介 质的折射率，可提高分辨率。（见下图解8-58） 图8-58 　分辨率还受照明强度及光源波长的影响，在一定范围内，照明强度大，分辨力就大。　　 放大率　　 放大率是指检视的放大倍率（即虚像放大倍率），倍率越大，工作距离越近。对每个具体物 镜来讲，它的放大倍率是不变的，工作距离也是不变的。如果采用10×目镜、40×物镜，观 察时放大了400倍，但对显微摄影来讲，由于要增加目镜到 感光片的这段距离就不是400倍了，有些显微摄影的摄影倍率是显微镜放大倍率的1/2。(见 显微摄影装置示意图)　　 对盖片厚度的要求　　 显微镜对盖片的厚度要求为抽筒的1/100,达0.16～0.17毫米，每差±0.01毫米抽筒则必须相 应改动10毫米，否则其放大倍率就不是标示的倍率了。　　 油浸镜（见右图8-59）是借点油的折射率来提高视野的亮度和分辨率。点油后使接物镜 与标本构成一个光具组。 图8-59 　　常用于油浸镜的点油及折射率为：　　 洋杉木油1.51　　 檀香木油1.51　　 甘油1.46　　 树胶1.52　　 苏合香1.58　　 折射率越大呈像亮度越强，分辨率也就越大。　　 （2）接目镜　　 接目镜主要有以下两个作用一是将物镜送来的初级放大影像再作第二次放大。　　 二是矫正接物镜成像中的相差、色差和照度。